[发明专利]一种RAD测序筛选中国大鲵雌性特异片段及遗传性别检测方法

摘要

本发明公开了一种RAD测序筛选中国大鲵雌性特异片段及遗传性别检测方法，步骤是：1）RAD测序技术扫描大鲵雌雄基因组池与数据分析：通过基因组DNA提取，酶切，建库，测序获得大鲵雌雄基因组RAD数据，对雌雄基因组RAD数据进行分析，获得雌雄特异候选RAD数据；2）候选雌性特异片段的验证：挑选雌性特异候选片段并设计引物，以DNA为模板进行PCR扩增，将能扩增出预期大小片段，只有雌性个体有特异条带，雄性个体无条带为特异标记；3）雌性特异片段的序列分析：将特异片段克隆到PMD‑18T载体中，连接、转化后用常规方法检测阳性克隆，送样测序，同源性达到96%。方法准确、易行、价格低廉且操作简便，解决了目前生产上对大鲵性别鉴定的难题。

主权项

1.一种RAD测序筛选中国大鲵雌性特异片段及遗传性别检测方法，其步骤是：A、中国大鲵雌性特异片段的筛选：1）RAD测序技术扫描大鲵雌雄基因组池与数据分析：通过基因组DNA提取，酶切，建库，测序获得大鲵雌雄基因组RAD数据，对雌雄基因组RAD数据进行分析，获得雌雄特异候选RAD数据，将数据进行组装后获得大鲵雌雄基因组特异片段，大鲵雌性特异片段与大鲵雄性基因组数据比对，获得雌性特异候选片段；2）候选雌性特异片段的验证：挑选雌性特异候选片段并设计引物，以5雌5雄个体DNA为模板进行PCR扩增，将能扩增出预期大小片段，只有雌性个体有特异条带，雄性个体无条带为特异标记；3）雌性特异片段的序列分析：将特异片段克隆到PMD‑18T载体中，连接、转化后用常规方法检测阳性克隆，送样测序，将获得5个个体阳性克隆测序结果进行序列比对，同源性达到96%，Genebank数据库比对结果显示，未找到同源序列；B、中国大鲵遗传性别鉴定的PCR方法：根据之前克隆验证的测序特异片段：adF324和adF225，分别设计引物adF324a，adF324s，adF225a与adF225s，分别提取大鲵雌性个体24尾，雄性个体24尾基因组DNA作为模板，进行PCR扩增，扩增出特异条带为遗传雌性个体，扩增不出特异条带为遗传雄性个体。