[发明专利]分光光度计测定李果实中磷酸葡萄糖异构酶活性的方法有效
| 申请号： | 201710264739.7 | 申请日： | 2017-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN107036987B | 公开（公告）日： | 2019-07-23 |
| 发明（设计）人： | 姜翠翠;叶新福;方智振;周丹蓉;潘少霖 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院果树研究所 |
| 主分类号： | G01N21/31 | 分类号： | G01N21/31 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明具体涉及一种分光光度计测定李果实中磷酸葡萄糖异构酶（glucose‑6‑phosphate isomerase,GPI）活性的方法。本发明方法主要包括以下步骤：对照CK的测定，样品提取液制备，脱盐，酶促反应，GPI活性计算。本发明方法简便、快速、准确，具有良好的重复性，可作为李果实中GPI活性的测定方法。 | ||
| 搜索关键词： | 分光光度计 果实 磷酸葡萄糖异构酶活性 磷酸葡萄糖异构酶 样品提取液 活性计算 酶促反应 脱盐 制备 | ||
【主权项】：
1.一种分光光度计测定李果实中磷酸葡萄糖异构酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：对照CK的测定，样品提取液制备，脱盐，酶促反应，GPI活性计算；所述酶促反应的酶为6‑磷酸葡萄糖脱氢酶，己糖激酶以及蔗糖转化酶；具体步骤为：（1）对照CK的测定：蔗糖转化酶将蔗糖转化为葡萄糖和果糖，葡萄糖在6‑磷酸葡萄糖脱氢酶作用下脱氢引起吸光值变化Abs1=（A1CK‑A0CK）；（2）样品提取液的制备：取0.15g冷冻的李果肉样品，用1.6ml提取液研磨至匀浆；（3）脱盐：提取完成后4℃，12000g下离心20min，取上清液过G25脱盐柱，收集脱盐产物；（4）酶促反应：取脱盐产物100ul于800ul反应体系测定，该反应体系含100mM pH为6.9的咪唑‑HCl，5mM MgCl2，0.5mM NAD，1mM ATP，100ul提取液，2U 6‑磷酸葡萄糖脱氢酶，2U 己糖激酶，2U蔗糖转化酶，以加入10mM的蔗糖起始反应，于340nm处检测吸光值的变化Abs2=（A1‑A0）；（5）GPI活性计算：利用公式GPI= n·(Abs2‑Abs1)/(6.22·w·t)计算GPI活性，其活性单位为nmol·g‑1·s‑1；其中，n为稀释倍数，6.22为吸光系数w为样品质量， t为反应时间。
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