[发明专利]分光光度计测定李果实中磷酸葡萄糖异构酶活性的方法

权利要求书

1.一种分光光度计测定李果实中磷酸葡萄糖异构酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：对照CK的测定，样品提取液制备，脱盐，酶促反应，GPI活性计算；

所述酶促反应的酶为6-磷酸葡萄糖脱氢酶，己糖激酶以及蔗糖转化酶；

具体步骤为：

（1）对照CK的测定：蔗糖转化酶将蔗糖转化为葡萄糖和果糖，葡萄糖在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下脱氢引起吸光值变化Abs1=（A1_CK-A0_CK）；

（2）样品提取液的制备：取0.15g冷冻的李果肉样品，用1.6ml提取液研磨至匀浆；

（3）脱盐：提取完成后4℃，12000g下离心20min，取上清液过G25脱盐柱，收集脱盐产物；

（4）酶促反应：取脱盐产物100ul于800ul反应体系测定，该反应体系含100mM pH为6.9的咪唑-HCl，5mM MgCl₂，0.5mM NAD，1mM ATP，100ul提取液，2U 6-磷酸葡萄糖脱氢酶，2U己糖激酶，2U蔗糖转化酶，以加入10mM的蔗糖起始反应，于340nm处检测吸光值的变化Abs2=（A1-A0）；

（5）GPI活性计算：利用公式GPI= n·(Abs2-Abs1)/(6.22·w·t)计算GPI活性，其活性单位为nmol·g^-1·s^-1；其中，n为稀释倍数，6.22为吸光系数w为样品质量， t为反应时间。

2.根据权利要求1所述的一种分光光度计测定李果实中磷酸葡萄糖异构酶活性的方法，其特征在于，所述步骤（2）或（4）中的提取液成分为50mM pH为7.5的Hepes–KOH缓冲液，2mM EDTA，10mM MgCl₂，10mM 二硫苏糖醇，1%(w/v) 曲拉通X-100，30% (w/v) 甘油，1% (w/v) 牛血清蛋白，5% (w/v) 聚乙烯吡咯烷酮，和1mM 苯甲磺酰氟。