[发明专利]一种成年大鼠心肌细胞分离方法在审
| 申请号： | 201710264517.5 | 申请日： | 2017-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN108728405A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 蒋敏;齐来俊;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种成年大鼠心肌细胞分离方法，包括步骤：（a）预热灌流系统，并充分清洗灌流管道；（b）大鼠腹腔先后注射肝素钠和戊巴比妥钠；（c）迅速打开大鼠胸腔暴露心脏，自主动脉根部取出下心脏置于灌注溶液中，适当清除周围组织后，将主动脉结扎于灌注针上；（d）将插管后的心脏连接灌流系统，无Ca2+的灌注溶液灌注心脏；（e）心脏继续灌注混合消化酶液；（f）取下灌注后的心脏置于转移液中，去除心房和大血管去除心房和大血管，将心室剪成小块，吸管吹打使组织成单分散细胞，筛网过滤细胞悬液，静置；（g）梯度复Ca2+；（h）完全培养基重悬复Ca2+后细胞沉淀，接种于包被后的细胞培养瓶中培养。本发明提供的成年大鼠心肌细胞分离方法可获得高质量、高产量、存活时间长的成年大鼠心肌细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 成年大鼠心肌细胞 心脏 灌注 灌流系统 灌注溶液 大血管 心房 去除 吸管 混合消化酶 完全培养基 戊巴比妥钠 细胞培养瓶 主动脉根部 主动脉结扎 大鼠腹腔 分散细胞 筛网过滤 细胞沉淀 细胞悬液 周围组织 肝素钠 灌注针 转移液 吹打 胸腔 预热 插管 心室 包被 大鼠 灌流 取下 小块 重悬 接种 存活 清洗 取出 注射 暴露 | ||
【主权项】：
1.一种成年大鼠心肌细胞分离及培养方法，其特征在于，包括步骤：（a）预热灌流系统，并充分清洗灌流管道；（b）大鼠腹腔先后注射肝素钠和戊巴比妥钠；（c）迅速打开大鼠胸腔暴露心脏，自主动脉根部取出下心脏置于灌注溶液中，适当清除周围组织后，将主动脉结扎于灌注针上；（d）将插管后的心脏连接灌流系统，无Ca2+的灌注溶液灌注心脏；（e）心脏继续灌注混合消化酶液；（f）取下灌注后的心脏置于转移液中，去除心房和大血管，将心室剪成小块，吸管吹打使组织成单分散细胞，筛网过滤细胞悬液，静置；（g）梯度复Ca2+；（h）完全培养基重悬复Ca2+后细胞沉淀，接种于包被后的细胞培养瓶中培养。
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