[发明专利]一种用于制备6‑氨基青霉烷酸的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法有效
| 申请号： | 201710236750.2 | 申请日： | 2017-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN106967704B | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 王旭东;修志龙;董悦生;王启斌 | 申请（专利权）人： | 山西新国大医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/84 | 分类号： | C12N9/84;C12N11/00;C12P37/06 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司11283 | 代理人： | 严政,刘依云 |
| 地址： | 037006 山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种用于制备6‑氨基青霉烷酸的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法。该方法包括以下步骤(1)制备含有青霉素酰化酶粗酶液和无机盐的无机盐混合溶液，该含盐混合溶液中所述无机盐的浓度为0.05‑0.35g/mL；(2)将步骤(1)所得无机盐混合溶液与叔丁醇混合，然后进行分相，得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固体以及富含盐和青霉素酰化酶的下相溶液组成的三相分配体系；(3)向步骤(2)所得下相溶液中加入载体进行青霉素酰化酶的固定化。本发明的方法操作简便、所得青霉素酰化酶的活性和收率较高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 制备 氨基 青霉 青霉素 酰化酶 分离 纯化 固定 耦合 方法 | ||
【主权项】：
一种用于制备6‑氨基青霉烷酸的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)制备含有青霉素酰化酶粗酶液和无机盐的无机盐混合溶液，该含盐混合溶液中所述无机盐的浓度为0.15‑0.3g/mL；其中，所述无机盐混合溶液的pH为5‑8；(2)将步骤(1)所得无机盐混合溶液与叔丁醇混合，然后进行分相，得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固体以及富含盐和青霉素酰化酶的下相溶液组成的三相分配体系；其中，所述无机盐混合溶液与叔丁醇的体积比为1：0.2‑1.5；(3)向步骤(2)所得下相溶液中加入载体进行青霉素酰化酶的固定化；其中，所述下相溶液的酶活为50‑150IU/mL，若高于150IU/mL用水稀释至上述范围。
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