[发明专利]测定芦丁与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法

摘要

本发明公开了一种测定芦丁与蛋白结合水平的表面等离子体共振(SPR)分析方法，分析对象为芦丁与蛋白的相互作用体系，分析目标为求得该相互作用反应的平衡常数。本方法中芦丁用吡啶溶解并以含有吡啶的缓冲溶液稀释，解决了芦丁在水溶液中溶解度不足的问题，使之产生足够强的SPR信号。此外，分析过程中在配制稀释的芦丁溶液时一一对应地配制了相同组分但不含芦丁的吡啶的稀释溶液，用于测定吡啶对SPR信号的影响，以准确获得芦丁产生的相互作用信号。

主权项

一种测定芦丁与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法，包括以下步骤：1)对洁净的传感芯片进行表面羧基化修饰；2)筛选用于溶解目标蛋白的缓冲液的pH值；3)对传感芯片表面修饰的羧基进行活化；4)将目标蛋白溶解于步骤2)选定pH的缓冲液中，使之流经步骤3)活化的芯片表面，将目标蛋白共价结合到芯片上；5)配制芦丁浓度为c1、c2、…、ci的系列溶液，其中i为自然数；6)按浓度由稀至浓的顺序将步骤5)配制的芦丁溶液送入表面等离子体共振仪中，通过步骤4)处理后的传感芯片，记录每一个浓度为ci的芦丁溶液进样且信号稳定后的信号值Ri，同时，记录不含有芦丁但其他成分相同的对照溶液进样且信号稳定后的信号值ri；7)数据分析：计算各个1/ci和1/(Ri‑ri)，并以1/(Ri‑ri)对1/ci作图，1/ci为横坐标，1/(Ri‑ri)为纵坐标；对图中数据点进行线性拟合，所得方程的截距记为b，斜率记为a，则结合反应的平衡常数为b/a，单位为实验中所用浓度单位的倒数。