[发明专利]一种从植物内生真菌中提取小分子活性成分的方法

摘要

本发明涉及一种从植物内生真菌中提取小分子活性成分的方法,包括其特征在于(1)将植物内生真菌菌体悬浮液进行首次加压粗孔过滤操作，将菌丝体和培养液进行初步分离；(2)将分离所得的菌丝体快速反复冻融，加压过滤，所得培养液滤液合并经再次微孔过滤，除去大分子杂质；(3)所得滤液进行真空浓缩，按极性由低到高的顺序加入不同有机溶剂进行低温超声萃取；(4)所得不同极性的有机溶液经大孔树脂柱层析吸附除去残余多糖、蛋白质分子、油脂类、色素杂质，真空冷冻干燥；(4)所得小分子活性成分的混合物分别用13C‑NMR技术手段加以分析。本发明包括低温冻融提取装置和低温超声萃取装置，旨在弥补现有通用的高温干燥菌丝，再粉碎浸提提取植物内生真菌小分子次级代谢产物方法的显著缺陷，提供一种高效,简单并且完善的提取方法。

主权项

一种从植物内生真菌中提取小分子活性成分的方法,其特征在于,所述小分子天然活性产物的提取制备方法包括以下步骤:步骤一、将发酵罐或液体培养基中扩大化培育完成的植物内生真菌菌体悬浮液进行首次加压粗孔过滤操作，并用洁净水多次洗涤菌丝，将菌丝体和培养液进行初步分离；步骤二、上述分离所得的菌丝体用2‑3倍体积的洁净水浸泡20min,在‑10℃‑30℃温度区间快速反复冻融4‑6次，所得冻融液体加压过滤(0.15MPa维持10min)，与S101步骤所得培养液合并经再次微孔过滤，除去大分子杂质；得到滤液，滤渣舍弃；步骤三、将S102步骤所得滤液进行真空浓缩，所得高浓度水溶液与S101步骤所得菌丝体混合，再按极性由低到高的顺序加入不同有机溶剂进行低温超声萃取60‑80min,萃取温度设定为20℃‑24℃，所得有机溶剂分离流出；步骤四、S103步骤所得不同极性的有机溶液经大孔树脂柱层析吸附除去残余多糖、蛋白质分子、油脂类、色素杂质，得到含小分子活性成分的有机溶液，真空冷冻干燥以除去溶剂,得到小分子活性成分物质；步骤五、S104步骤所小分子活性成分的混合物分别用13C‑NMR技术手段加以分析，根据其化学位移的分布区间来推测其是否含有潜在活性结构的物质，为精确分离提供参考依据。