[发明专利]一种同步检测5种西瓜病毒的多重RT-PCR方法及其应用

摘要

本发明属于农作物病害诊断和分子生物学技术领域，公开了一种同步检测5种西瓜病毒的多重PCR方法，该PCR体系中含有5对特异性引物(SEQ ID NO1～10)，在一个PCR体系中同步对5种病毒进行扩增，得到了1464bp、1023bp、810bp、600bp和327bp的特异性条带，建立并优化了能同步检测CiLCV、CGMMV、ZYMV、MABYV和WMV的多重RT‑PCR反应体系。检测结果表明优化后的多重RT‑PCR反应体系能对田间样品进行快速、高效地、准确的检测。对监测西瓜上CiLCV等5种常见病毒病在田间的发生情况以及病害流行预测具有十分重要的意义。

主权项

1.一种同步检测CiLCV、CGMMV、ZYMV、MABYV和WMV五种西瓜病毒的多重RT-PCR方法，在同一PCR体系中，包含有如下特异性引物：/n扩增CiLCV的特异性引物的核苷酸序列为：/nSEQ ID NO.1：5′-CATTGGTGGAGCACAAAACAAA-3′，/nSEQ ID NO.2：5′-TTGCGTCTTAGCCTATCTGC-3′；/n扩增CGMMV的特异性引物的核苷酸序列为：/nSEQ ID NO.3：5′-GTTGCGAGGAATGTGATGTA-3′，/nSEQ ID NO.4：5′-AAGACTGTCTGCGAACCTCC-3′；/n扩增ZYMV的特异性引物的核苷酸序列为：/nSEQ ID NO.5：5′-AGCAAACTGTGGCAGACGCT-3′，/nSEQ ID NO.6：5′-CTAGTAAGGTATGCATGTTT-3′；/n扩增MABYV的特异性引物的核苷酸序列为：/nSEQ ID NO.7：5′-TTGGAGGTTATGCAGATTTTCG-3′；/nSEQ ID NO.8：5′-GCCGGTCATCAGTATCAAGTCT-3′；/n扩增WMV的特异性引物的核苷酸序列为：/nSEQ ID NO.9：5′-TCGAATACAAGCCCAATCAA-3′；/nSEQ ID NO.10：5′-ACGGACTTTCAGAGTTTCTC-3′；/n所述PCR体系中CiLCV、CGMMV、ZYMV、MABYV和WMV引物的摩尔比分别为3：4：4：3：3。/n