[发明专利]一种烯键还原酶及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种烯键还原酶以及制备方法和应用，本发明提供的烯键还原酶，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，由碱基序列如SEQ ID No.1所示烯键还原酶基因编码。本发明公开该还原酶或其重组酶作为催化剂在不对称还原共轭C＝C双键以制备光学活性的带吸电子基团饱和化合物中的应用。本发明提供的重组酶的制备方法简单，可作为催化剂应用于共轭C＝C双键的不对称还原，适用的化合物范围广，具有优异的催化活性，可获得高转化率、高光学纯度的带吸电子基团饱和化合物，且反应条件温和、对环境友好，具有很好的工业应用开发前景。

主权项

1.一种烯键还原酶重组表达转化体表达的烯键还原酶在不对称还原α,β-不饱和化合物中C=C双键中的应用，其特征在于，/n所述α,β-不饱和化合物的结构式如式（I）/n (I),/n其中，M为CR¹R²、NR³；/nQ为C=O；/nR为氢、C_1-4烷基或硝基；当R为硝基时，Q为CH₂；/nn为0、1、2；/nR¹、R²各自独立地为氢或C_1-4烷基；/nR³为取代或非取代C_6-12芳基；/nR⁴和R⁵各自独立地为氢或C_1-4烷基/n所述烯键还原酶基因，其碱基序列如SEQ ID No.1所示；/n其重组酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2 所示；所述烯键还原酶重组表达转化体由下述方法制得：通过引物，以紫红色红球菌Rhodococcus rhodochrous ATCC 17895的全基因组为模板，经聚合酶链式反应进行基因扩增，得碱基序列如SEQ ID No.1所示的烯键还原酶基因，之后将烯键还原酶基因连接于载体上得包含SEQ ID No.1所示的烯键还原酶基因的重组表达载体；将所得烯键还原酶重组表达载体转化至宿主微生物中制得的异源表达菌株，即获得烯键还原酶重组表达转化体；所述的引物为：上游引物为GGAATTCCATATGGTTGCAGTAAAGCCTT，/n下游引物为CCCAAGCTTTTACGCCTTGGTATCAATAG；/n所述的宿主微生物为大肠杆菌；/n所述的载体为质粒pET28a(+)。/n