[发明专利]一种角膜缘干细胞培养基及其培养方法

摘要

本发明公开了一种角膜缘干细胞培养基及其培养方法，培养基组分为：5mL 100×双抗、10～20ng/ml人重组EGF、5～10ug/ml胰岛素、1～5x10^‑9M 3‑碘甲状腺原氨酸、0.2～1ug/ml氢化可的松、10～20ng/ml霍乱毒素、10～15%胎牛血清、余量为DMEM和/或DMEM/F12；采用I型胶原蛋白作为角膜缘干细胞生长的基底物质对培养板等材料做涂层处理，提高角膜缘干细胞的纯度及稳定性，采用本发明提供的培养基分离角膜缘干细胞，细胞中p63、Pax6抗体阳性率为96%～100%。建立了一种无滋养层、无载体的角膜缘干细胞培养方法，为角膜缘干细胞特异性机制研究和移植治疗提供了稳定的细胞来源。

主权项

1.一种角膜缘干细胞的分离培养方法，其特征在于，是将角膜缘组织清洗后，对角膜缘组织进行酶解得角膜缘干细胞，加入角膜缘干细胞培养基进行培养即可；所述酶解是二次酶解；所述二次酶解是先用IV胶原酶酶解，再用碱性蛋白酶酶解；其中，所述角膜缘干细胞培养基中含有以下组分：5mL 100×双抗、10‑20ng/ml人重组EGF、5‑10ug/ml胰岛素、1‑5×10‑9M 3‑碘甲状腺原氮酸、0.2‑lug/ml氢化可的松、10‑20ng/ml霍乱毒素、10‑15％胎牛血清、余量为DMEM和/或DMEM/F12。