[发明专利]一种油乳剂蛋白亚单位疫苗中蛋白含量和纯度的检测方法及其应用

摘要

本发明提供了一种油乳剂蛋白亚单位疫苗中蛋白含量和纯度的检测方法及其应用，该方法包括：1)使用冷丙酮沉淀疫苗中的蛋白；2)SDS‑PAGE电泳；3)使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描；4)结合灰度扫描的结果计算疫苗中蛋白含量和纯度。该方法既解决了油乳剂疫苗中抗原蛋白解离效率低且易变性降解的问题，也解决了成品兽用油乳剂蛋白亚单位疫苗的质检中使用靶动物进行实验的难题，在抗原蛋白含量的定量及纯度的检测中准确率达到90％以上；且不会导致抗原蛋白的变性降解且易重复；同时通过对得到的抗原蛋白进行一次SDS‑PAGE检测就能够获得油乳剂蛋白亚单位疫苗中抗原蛋白的含量和纯度的结果，节约了成本、劳动力和时间。

主权项

1.一种油乳剂蛋白亚单位疫苗中蛋白含量和纯度的检测方法，其特征在于，所述油乳剂蛋白亚单位疫苗包括一种抗原蛋白和油佐剂，所述油佐剂为ISA 201 VG、ISA 35 VG或白油；所述检测方法包括以下步骤：1)使用冷丙酮沉淀所述油乳剂蛋白亚单位疫苗中的蛋白，其中，所述冷丙酮为丙酮置于﹣20℃冰箱预冷处理2h以上获得；所述使用冷丙酮沉淀所述油乳剂蛋白亚单位疫苗中的蛋白包括以下步骤：a)取理论蛋白含量为2～10μg的所述油乳剂蛋白亚单位疫苗于1.5ml EP管中，根据所取所述油乳剂蛋白亚单位疫苗的体积加入冷丙酮，其中冷丙酮与所述油乳剂蛋白亚单位疫苗的体积比为9:1，放入﹣20℃处理至少1h；b)将a)中样品12,000rpm，4℃，离心20min，去除上层液体，留沉淀，待丙酮挥发干燥之后，加入20μl PBS重悬；c)重悬后每管加入5μl 5*loading buffer，沸水中蒸煮10min；12,000rpm，4℃离心5min，待用；2)SDS‑PAGE电泳；3)将凝胶置于常规成像仪进行拍摄，保存图片；4)将步骤3)中图片置于常规灰度扫描仪中，使用软件定义标准蛋白条带的灰度为1，由此得到样品蛋白条带相对于标准蛋白条带的灰度比较结果，再将样品蛋白条带相对于标准蛋白条带的灰度比较结果×标准蛋白的含量，从而得到样品蛋白的含量；以及5)将步骤3)中图片置于常规灰度扫描仪中，使用软件选中样品蛋白条带所在的泳道，再对该泳道的所有条带进行灰度扫描，从而得到样品蛋白条带相对于样品中所有蛋白条带的比值，该比值为样品蛋白纯度。