[发明专利]一种基于间接竞争酶联免疫法定量检测油胺枝接聚琥珀酰亚胺高分子纳米药物载体的方法

摘要

本发明公开了一种基于间接竞争酶联免疫法定量检测油胺枝接聚琥珀酰亚胺(PSIOAm)高分子纳米药物载体的方法，利用了二抗放大了检测信号，提高了实验分析的灵敏度，即通过测量PSIOAm包被抗原、PSIOAm抗体即一抗与HRP标记的羊抗兔抗体即二抗，三者复合物的光学性号达到定量检测PSIOAm的目的，该方法操作简单，可行性高，灵敏度高，检出限低，可实现高通量检测。

主权项

一种基于间接竞争酶联免疫法定量检测油胺接枝聚琥珀酰亚胺（PSIOAm）高分子纳米药物载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、制备PSIOAm包被抗原和免疫原；b、制备PSIOAm抗体：c、将PSIOAm包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的PSIOAm标准液，以PSIOAm抗体作为一抗，HRP标记的羊抗兔抗体作为二抗，进行间接竞争酶联免疫分析法；d、以PSIOAm标准液浓度的对数为横坐标，吸光度值为纵坐标建立标准曲线，从而定量检测出PSIOAm的浓度；所述步骤a具体包括以下步骤：a‑1、水解PSIOAm，得到水解后的PSIOAm溶液；a‑2、向水解后的PSIOAm溶液中，加入羟基琥珀酰亚胺、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和牛血清白蛋白，20‑30℃温育3‑6小时后，离心分离，取沉淀分散于pH=7.4的PBS缓冲液中即得到PSIOAm免疫原溶液；a‑3、向水解后的PSIOAm溶液中，加入羟基琥珀酰亚胺、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和鸡卵清白蛋白，20‑30℃温育3‑6小时后，离心分离，取沉淀分散于pH=7.4的PBS缓冲液中即得到PSIOAm包被抗原溶液；a‑4、将PSIOAm免疫原溶液和PSIOAm包被抗原溶液分别置于透析袋中，以pH=7.4的PBS缓冲液透析12‑16h后收集，即可得到PSIOAm免疫原和PSIOAm包被抗原。