[发明专利]一种基于新型SERS基底定量检测致病菌的方法

摘要

本发明公开一种基于新型SERS基底定量检测致病菌的方法，属于生物检测技术领域。本发明将免疫光谱标记处理的二氧化硅包裹金纳米颗粒用于致病菌的定量检测。本发明的拉曼光谱信号监测数据更加稳定可靠且可大量重复；本发明检测稳定性好，灵敏度高，特异性强、检测过程简单快速、准确定量，得到了一个宽的检测区间和低的检测限。本发明操作简单，SERS免疫信号探针与捕获探针都可以提前准备好，操作时只需将捕获探针和信号探针依次加入到待测样品中反应，反应结束后通过磁分离可以马上进行检测收集时间30s，然后立刻从标准曲线上读出浓度，从而实现快速定量检测；这可以满足食品安全和环境监测部门的要求，具有广泛的实用性。

主权项

一种基于新型SERS基底定量检测致病菌的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将拉曼信号分子结合到金纳米颗粒表面，随后通过氨水还原正硅酸乙酯的方法在结合了拉曼信号分子的金纳米颗粒表面形成二氧化硅薄层；(2)通过硅烷偶联剂将巯基修饰在步骤(1)中制备好的硅层上，再通过中间体将致病菌抗体修饰在该颗粒表面，用BSA封闭剩余活性位点，制备成拉曼信号探针；(3)采用活化剂活化表面修饰有羧基的磁珠，随后加入致病菌抗体和BSA制备成磁性纳米颗粒，即捕获探针；(4)将培养好的致病菌离心后用水重悬，并稀释成一组具有浓度梯度的标准样品液；(5)取相同体积的步骤(3)中的捕获探针，分别加入步骤(4)不同浓度的标准样品液，室温中孵育，磁分离后去掉上清液；再将步骤(2)中的拉曼信号探针加入，形成“捕获探针‑致病菌‑信号探针”的“三明治”结构；磁分离后，对上清液中剩余的拉曼信号探针进行信号采集；(6)根据致病菌浓度与拉曼信号强度的对应关系建立标准曲线，从而应用拉曼信号对致病菌进行定量检测。