[发明专利]一种固定化核酸酶P1及其制备方法与其应用

摘要

本发明公开了一种固定化核酸酶P₁的制备方法，包括如下步骤：(1)改性树脂：以表面修饰剂改性介孔树脂，得到表面改性的介孔树脂载体，所述的表面改性剂为伴刀豆蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚多巴胺中的一种或几种的混合物；所述的介孔树脂为环氧基树脂、氨基树脂、磺酸基树脂或者羧基化树脂；(2)核酸酶P₁固定化：将步骤(1)得到的介孔树脂载体加入到0.5~6g/L核酸酶P₁酶液中，核酸酶P₁与树脂的质量比为10~250mg：1g，混合，在25℃振荡反应时间2~12h，抽滤得到树脂固定化核酸酶P₁。本发明提供的表面改性介孔树脂微球固定化方法，核酸酶P₁的催化性能高，可使RNA水解率达到95%以上。

主权项

1.一种固定化核酸酶P₁的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）改性树脂：以表面修饰剂改性介孔树脂，得到表面改性的介孔树脂载体；其中，所述的表面改性剂为伴刀豆蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚多巴胺中的一种或几种的混合物；所述的介孔树脂为环氧基树脂、氨基树脂、磺酸基树脂或者羧基化树脂；（2）核酸酶P₁固定化：将步骤（1）得到的介孔树脂载体加入到0.5～6g/L核酸酶P₁酶液中，核酸酶P₁与树脂的质量比为5～20mg：lg，混合，在25℃振荡反应时间2～12h，抽滤得到树脂固定化核酸酶P₁；步骤（1）中，利用伴刀豆蛋白改性介孔树脂的方法如下：（1a）伴刀豆蛋白活化：将伴刀豆蛋白溶于缓冲液中，所述的缓冲液包括如下组分：0.1mol/L KC1、0.01mol/LCaC1₂、0.01mol/ L MnC1₂、0.1mol/L KH₂PO₄、0.1mol/LK₂HPO₄，pH7.0，得到伴刀豆蛋白溶液；（1b）戊二醛活化介孔树脂：将50~200g介孔树脂加入成二醛溶液中，所述的戊二醛溶液为戊二醛质量分数为2%的0.1mol/L，pH8.0的磷酸缓冲液，搅拌15~60min，得到戊二醛活化的介孔树脂；（1c）伴刀豆蛋白修饰介孔树脂：将戊二醛活化的介孔树脂加入伴刀豆蛋白溶液中，在25℃、150rmp下震荡6~18h，去除上清，水洗介孔树脂，得到伴刀豆蛋白修饰的介孔树脂；步骤（1）中，利用聚乙二醇、聚多巴胺、聚乙烯吡咯烷酮改性介孔树脂的方法如下：（2a）配制改性剂溶液：0.05~5g/L聚乙二醇溶液、0.1~3g/L盐酸多巴胺Tris溶液、1~5g/L聚乙烯吡咯烷酮溶液；（2b）取1~5g介孔树脂于反应容器中，加入50～300mL相应的改性剂溶液，置于25℃、120~180rmp恒温摇床中震荡，去除上清，水洗介孔树脂，得到改性的介孔树脂。