[发明专利]一种固定化核酸酶P1及其制备方法与其应用

权利要求书

1.一种固定化核酸酶P₁的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）改性树脂：以表面修饰剂改性介孔树脂，得到表面改性的介孔树脂载体；

其中，所述的表面改性剂为伴刀豆蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚多巴胺中的一种或几种的混合物；

所述的介孔树脂为环氧基树脂、氨基树脂、磺酸基树脂或者羧基化树脂；

（2）核酸酶P₁固定化：将步骤（1）得到的介孔树脂载体加入到0.5～6g/L核酸酶P₁酶液中，核酸酶P₁与树脂的质量比为5～20mg：lg，混合，在25℃振荡反应时间2～12h，抽滤得到树脂固定化核酸酶P₁；

步骤（1）中，利用伴刀豆蛋白改性介孔树脂的方法如下：

（1a）伴刀豆蛋白活化：将伴刀豆蛋白溶于缓冲液中，所述的缓冲液包括如下组分：

0.1mol/L KC1、0.01mol/LCaC1₂、0.01mol/ L MnC1₂、0.1mol/L KH₂PO₄、0.1mol/LK₂HPO₄，pH7.0，得到伴刀豆蛋白溶液；

（1b）戊二醛活化介孔树脂：将50~200g介孔树脂加入成二醛溶液中，所述的戊二醛溶液为戊二醛质量分数为2%的0.1mol/L，pH8.0的磷酸缓冲液，搅拌15~60min，得到戊二醛活化的介孔树脂；

（1c）伴刀豆蛋白修饰介孔树脂：将戊二醛活化的介孔树脂加入伴刀豆蛋白溶液中，在25℃、150rmp下震荡6~18h，去除上清，水洗介孔树脂，得到伴刀豆蛋白修饰的介孔树脂；

步骤（1）中，利用聚乙二醇、聚多巴胺、聚乙烯吡咯烷酮改性介孔树脂的方法如下：

（2a）配制改性剂溶液：0.05~5g/L聚乙二醇溶液、0.1~3g/L盐酸多巴胺Tris溶液、1~5g/L聚乙烯吡咯烷酮溶液；

（2b）取1~5g介孔树脂于反应容器中，加入50～300mL相应的改性剂溶液，置于25℃、120~180rmp恒温摇床中震荡，去除上清，水洗介孔树脂，得到改性的介孔树脂。

2.根据权利要求1所述的固定化核酸酶P₁的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的核酸酶P1的氨基酸序列如 SEQ ID NO．：1所示。

3.权利要求1～2任一所述固定化核酸酶P₁的制备方法制备得到的树脂固定化核酸酶P1。

4.权利要求3所述树脂固定化核酸酶P₁在水解RNA制备核苷酸中的应用。