[发明专利]一种熊去氧胆酸的制备方法及其制备用酶

摘要

本发明涉及一种利用生物酶催化技术制备熊去氧胆酸的方法及其制备用7β‑类固醇脱氢酶。该方法以3α‑羟基‑7氧代‑5β‑胆烷酸为底物，在NADP、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶以及缓冲溶液存在的条件下，用7β‑类固醇脱氢酶催化3α‑羟基‑7氧代‑5β‑胆烷酸制备熊去氧胆酸，其中7β‑类固醇脱氢酶来源于Turneriella parva。该方法操作简单、反应条件温和易控、反应时间短、对底物的转化率高达99.8%以上，所获得的产品的含量在98.5%以上。

主权项

一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于：以3α‑羟基‑7氧代‑5β‑胆烷酸为底物，在NADP+、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶以及缓冲溶液存在的条件下，用7β‑类固醇脱氢酶催化3α‑羟基‑7氧代‑5β‑胆烷酸制备熊去氧胆酸，所述7β‑类固醇脱氢酶来源于Turneriella parva，所述葡萄糖脱氢酶来源于巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium，其基因序列如SEQ ID NO:3所示，在整个催化反应体系中，所述底物的浓度为50～100mg/mL，所述NADP+的浓度为0.1～0.25mg/mL，所述葡萄糖的浓度为30～50mg/mL；所述7β‑类固醇脱氢酶为在SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列中进行下述突变：G15A+S16K、V38R+V39R、Y154W、K158E或R193Q+A195I后得到的突变体。