[发明专利]血链球菌蛋白在制备抑制白色念珠菌的药物上的应用

摘要

血链球菌蛋白在制备抑制白色念珠菌的药物上的应用，它涉及一种血链球菌蛋白在药物上的应用,解决了唑类、多稀类化学合成药物在治疗念珠菌感染中，毒副作用大且易产生耐药株菌的问题。它是把血链球菌混合蛋白用于制备抑制白色念珠菌的药物。血链球菌蛋白使白色念珠菌细胞形态改变，细胞膜通透性增大,抑制白色念珠菌的粘附作用和出芽生殖，阻断菌丝的生成。本发明用血链球菌提取物与真菌拮抗，证实其对真菌具有较强的抑制作用。

主权项

1.一种基于原子力显微镜对白色念珠菌致病力测定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备血链球菌蛋白提取物；（2）测定正常白色念珠菌菌体和菌丝的粘附力及杨氏模量：采用相对测量法，以赫兹模型为细胞模型，选取出芽生殖期的白色念珠菌的原子力显微镜平面成像图，将细胞中心作为基本观测点，在菌体细胞上以“#”字形随机选取4条观测线并划分菌体，测得每条观测线所有位点的XzDate，计算每条观测线的粘附力及杨氏模量的平均值，然后将4条观测线的平均值求和后再取平均值，最终分别获得较精确的菌体粘附力及杨氏模量；随机选取出芽生殖期菌丝的原子力显微镜平面成像图，由于出芽生殖的菌丝长度不一，随机选取长度为8至20μm的菌丝，取垂直于菌丝长轴的四条观测线平均五等分划分菌丝，测得每条观测线上所有位点的XzDate数值；菌丝粘附力、杨氏模量的平均值的求算方法与菌体粘附力、杨氏模量的平均值的求算方法相同；其中，所述XzDate为观测线上的x轴的每个点位所对应的z轴观测线上数值，在粘附力测量通道时表示各点粘附力值，在杨氏模量测量通道时表示各点杨氏模量值；（3）测定经血链素作用后的白色念珠菌的粘附力及杨氏模量：分别取浓度为1g/L的血链素200μL，浓度为5×10⁶cfu/mL的白色念珠菌菌悬液500μL加入到1mL的RPMI‑1640细胞培养基；震荡混匀，37℃恒温培养24h后取出涂片待检；借助白色念珠菌的原子力显微镜平面成像图，随机选取经血链球菌细菌素作用后的白色念珠菌进行观测，以垂直于菌体直径的方向将菌体直径划分为五等份，获得四条观测线；在粘附力及杨氏模量测量通道下，分别输出各通道下每条线上的所有位点的 XzDate值，将4条观测线的平均值求和后再次取平均值，观测经血链素作用后的白色念珠菌菌体的粘附力及杨氏模量的变化情况；其中，所述RPMI‑1640细胞培养基为在平衡盐溶液BSS的基础上，添加了氨基酸、维生素和其他与血清中浓度相似的营养物质的一种细胞培养基；（4）统计分析：采用SPSS19.0统计软件，计量资料采用x±s表示，采用配对样本T检验分析，P<0.05，得到有显著性差异，得到如下结果：得到所述正常白色念珠菌菌体的平均粘附力值为7.35±0.77nN；所述正常白色念珠菌菌丝的平均粘附力值为为9.82±0.39nN；所述正常白色念珠菌菌体杨氏模量的平均值为7.33±1.29Mpa；所述正常白色念珠菌菌丝杨氏模量的平均值为4.04±0.76Mpa；所述经血链球菌细菌素作用后的念珠菌的粘附力的平均值为5.69±0.62nN；所述经血链球菌细菌素作用后的念珠菌杨氏模量的平均值为5.03±0.81Mpa。