[发明专利]通过多重扩增双重信号扩增的目标核酸序列的检测方法有效
| 申请号： | 201680086433.0 | 申请日： | 2016-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN109415762B | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 林成植;金渊洙 | 申请（专利权）人： | 精确诊断有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 成都超凡明远知识产权代理有限公司 51258 | 代理人： | 魏彦 |
| 地址： | 韩国京畿*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种通过多重扩增双重信号扩增的目标核酸序列的检测方法(multiple amplification nested signal amplification；MANSA)，尤其涉及一种通过利用哑铃形寡核苷酸的目标核酸序列的第1次扩增反应以及第2次信号扩增反应而对目标核酸序列进行扩增以及检测的方法。本发明能够对非常有限的试料内的多个目标核酸序列进行检测且不会出现假阳性。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 多重 扩增 双重 信号 目标 核酸 序列 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用哑铃结构寡核苷酸对目标核酸序列进行检测的方法，其特征在于，包括：(a)通过利用以下述通式表示的哑铃结构寡核苷酸的第1次扩增反应而进行扩增的步骤：通式：5'‑A‑B‑C‑3'在上述通式中，上述A表示具有与所杂化的上述目标核酸序列中的某一位置实质性互补的核苷酸序列的5'‑低Tm特异性片段，包括与上述C中的某一位置实质性互补的核苷酸序列，上述B表示包含最少三个以上的通用碱基的分割片段，上述C表示具有与所杂化的上述目标核酸序列中的某一位置实质性互补的核苷酸序列的3'‑高Tm特异性片段，包括与上述A中的某一位置实质性互补的核苷酸序列，上述A的Tm低于上述C的Tm，而在三个片段中上述分割片段的Tm最低，上述分割片段在上述A以及C被杂化到上述目标核酸序列的条件下形成非碱基对结构，上述杂化是在不会独立发生C杂化的条件下实施，以及，(b)通过利用引物以及荧光发生指示剂的第2次扩增反应而对上述第1次扩增产物进行扩增，并从荧光发生指示剂检测出信号的步骤，而检测出上述信号代表目标核酸序列存在。
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