[发明专利]DNA重组中的或与DNA重组相关的改进

摘要

本发明提供了一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区，所述方法包括下述步骤：A)鉴定所述靶DNA中用于遗传元件的所需插入位点；B)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点上游的所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定上游同源区的5'范围；C)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点下游的同一所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定下游同源区的3'范围；D)合成侧接区基因盒，其引起所述上游和下游半位点的并置，从而导致形成侧接有所述上游和下游同源区的所选限制性内切核酸酶的完整限制性位点；以及E)将所述侧接区基因盒插入到包含用于操作所述靶DNA的遗传元件的质粒载体中，在所述质粒载体上提供所述必需的侧接同源区，用于在所述所需插入位点处在所述靶DNA内的重组。

主权项

1.一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区，所述方法包括下述步骤：A)鉴定所述靶DNA中用于遗传元件的所需插入位点；B)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点上游的所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定上游同源区的5'范围；C)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点下游的同一所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定下游同源区的3'范围；D)合成侧接区基因盒(FRC)，其引起上游半位点和下游半位点的并置，从而导致形成侧接有所述上游同源区和下游同源区的所选限制性内切核酸酶的完整限制性位点；以及E)将所述FRC插入到包含用于操作所述靶DNA的遗传元件的质粒载体中，在所述质粒载体上提供所述必需的侧接同源区，用于在所述所需插入位点处在所述靶DNA内的重组。