[发明专利]一种从链霉菌发酵液中分离纯化酮还原酶的方法在审
| 申请号： | 201611173713.3 | 申请日： | 2016-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN108203709A | 公开（公告）日： | 2018-06-26 |
| 发明（设计）人： | 郭少华 | 申请（专利权）人： | 上海塞恩泰恩生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200299 上海市杨*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种从链霉菌发酵液中分离纯化酮还原酶的方法。本发明还提供了从发酵液中分离提取酮还原酶的工艺流程。本发明整个操作流程中，能够较快的得到高纯度产物。 | ||
| 搜索关键词： | 酮还原酶 发酵液 分离纯化 霉菌 从链 高纯度产物 分离提取 整个操作 工艺流程 | ||
【主权项】：
1.一种从链霉菌发酵液中分离纯化酮还原酶的方法，其特征在于它，该方法包括以下步骤，(1)发酵液预处理：将链霉菌发酵液离心收集菌体，用含有KCl的Tris HCl缓冲液洗涤两遍，再用缓冲液悬浮菌体，备用；(2)菌体悬浮液处理：将步骤(1)中处理后的菌体悬浮液均质机匀浆，获得细胞破碎液；(3)离心：将步骤(2)的细胞破碎液离心，收集上清液，获得粗酶液；(4)DEAE柱层析：将步骤(3)中获得的粗酶液经DEAE纤维素柱层析，并用KCl缓冲液梯度洗脱，紫外检测并收集洗脱液；(5)DEAE柱层析：将步骤(4)中洗脱液经DEAE‑Sephecal柱层析，并用KCl缓冲液梯度洗脱，紫外检测并收集洗脱液；(6)凝胶过滤：将步骤(5)中收集到的洗脱液过Sephadex G100柱，3倍柱床体积缓冲液，紫外检测并收集洗脱液；(7)凝胶过滤：将步骤(6)中收集到的洗脱液过Sephacry S200柱，3倍柱床体积缓冲液，紫外检测并收集洗脱液；(8)冷冻干燥：将步骤(7)中收集到的洗脱液添加酶保护剂，混合均匀后冷冻干燥，获得高纯度酶干粉；
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