[发明专利]一种从链霉菌发酵液中分离纯化酮还原酶的方法在审
| 申请号： | 201611173713.3 | 申请日： | 2016-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN108203709A | 公开（公告）日： | 2018-06-26 |
| 发明（设计）人： | 郭少华 | 申请（专利权）人： | 上海塞恩泰恩生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200299 上海市杨*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酮还原酶 发酵液 分离纯化 霉菌 从链 高纯度产物 分离提取 整个操作 工艺流程 | ||
1.一种从链霉菌发酵液中分离纯化酮还原酶的方法，其特征在于它，该方法包括以下步骤，
(1)发酵液预处理：将链霉菌发酵液离心收集菌体，用含有KCl的Tris HCl缓冲液洗涤两遍，再用缓冲液悬浮菌体，备用；
(2)菌体悬浮液处理：将步骤(1)中处理后的菌体悬浮液均质机匀浆，获得细胞破碎液；
(3)离心：将步骤(2)的细胞破碎液离心，收集上清液，获得粗酶液；
(4)DEAE柱层析：将步骤(3)中获得的粗酶液经DEAE纤维素柱层析，并用KCl缓冲液梯度洗脱，紫外检测并收集洗脱液；
(5)DEAE柱层析：将步骤(4)中洗脱液经DEAE-Sephecal柱层析，并用KCl缓冲液梯度洗脱，紫外检测并收集洗脱液；
(6)凝胶过滤：将步骤(5)中收集到的洗脱液过Sephadex G100柱，3倍柱床体积缓冲液，紫外检测并收集洗脱液；
(7)凝胶过滤：将步骤(6)中收集到的洗脱液过Sephacry S200柱，3倍柱床体积缓冲液，紫外检测并收集洗脱液；
(8)冷冻干燥：将步骤(7)中收集到的洗脱液添加酶保护剂，混合均匀后冷冻干燥，获得高纯度酶干粉；
2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(1)中缓冲液的浓度为0.025mol/L。
3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中均质机的压力为80Mpa，均质时间为3min；
4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(3)中离心转速为5000-6000rpm，时间为3-5min；
5.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(4)、(5)、(6)、(7)中的缓冲液为0.025mol/L Tris HCl，流速为3-5BV/h；
6.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(4)中KCl的梯度范围为0.2-0.5mol/L；
7.根据权利要求l中所述的方法，其特征在于：在步骤(5)中KCl的梯度范围为0.2-0.35mol/L，洗脱酶蛋白的范围为0.22-0.24mol/L；
8.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(8)中酶保护剂为15％的甘油+5％乙二醇。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海塞恩泰恩生物科技有限公司，未经上海塞恩泰恩生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201611173713.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
