[发明专利]一种石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白的制备方法及其应用有效
申请号: | 201611159701.5 | 申请日: | 2016-12-15 |
公开(公告)号: | CN106591328B | 公开(公告)日: | 2019-07-05 |
发明(设计)人: | 袁于人;殷波;陆洲 | 申请(专利权)人: | 斯澳生物科技(苏州)有限公司 |
主分类号: | C12N15/40 | 分类号: | C12N15/40;C12N15/70;A61K39/12;A61P31/14 |
代理公司: | 苏州国诚专利代理有限公司 32293 | 代理人: | 韩凤 |
地址: | 215123 江苏省苏州*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白的制备及其应用,含以下步骤:将含有石斑鱼神经坏死病毒(NNV)衣壳蛋白基因的重组载体pET32a‑NNV转化到大肠杆菌BL21,诱导融合基因进行表达;将表达后的NNV衣壳蛋白包涵体进行纯化;将纯化后的NNV衣壳蛋白添加到黄粉虫饲料中,将虫体培养至特定阶段,冷冻干燥并碾磨成粉末;用虫体粉末喂食石斑鱼,使石斑鱼免疫神经坏死病毒。本发明提供的方法可以使用大肠杆菌大量表达NNV衣壳蛋白;食用了NNV衣壳蛋白的黄粉虫体粉能有效提高石斑鱼对神经坏死病的免疫力。 | ||
搜索关键词: | 衣壳蛋白 石斑鱼 神经坏死病毒 大肠杆菌 黄粉虫 虫体 制备 生物技术领域 衣壳蛋白基因 融合基因 重组载体 包涵体 坏死病 碾磨 喂食 免疫力 应用 诱导 食用 神经 饲料 转化 | ||
【主权项】:
1.一种石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白的制备方法,其特征在于,包含以下步骤:(1)将含有石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白基因的重组质粒pET32a‑NNV转化到大肠杆菌BL21中,37℃、250rpm条件下,当OD600达到0.6时加入IPTG,直至IPTG终浓度为1mM,降温至25℃,诱导表达12h;(2)诱导表达完成后离心收集菌体,破碎,对包涵体进行纯化,将纯化后的包涵体冷冻干燥,碾磨成粉末,过80目筛;所述石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白大小为37kDa;所表达石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白的基因序列为Seq ID No1。
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