[发明专利]一种小鼠胚胎细胞及其制备方法和非手术转移方法在审
| 申请号： | 201611125832.1 | 申请日： | 2016-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN106544368A | 公开（公告）日： | 2017-03-29 |
| 发明（设计）人： | 蔡军利 | 申请（专利权）人： | 青岛松良基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/877 | 分类号： | C12N15/877;C12N5/10;A61D19/04 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371 | 代理人： | 王闯 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市市*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 一种小鼠胚胎细胞及其制备方法和非手术转移方法，属于诱导多能胚胎干细胞领域。本发明提供的小鼠胚胎的制备方法通过制备、孵育培养供体细胞，细胞融合和胚胎细胞培养和检选等步骤，能通过简单易行的操作方法，快速的诱导并制备出小鼠的胚胎细胞，该胚胎细胞具有较好的全能性和分化能力，能满足各种遗传、发育实验等的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小鼠 胚胎 细胞 及其 制备 方法 手术 转移 | ||
【主权项】：
一种小鼠胚胎的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备供体细胞步骤：取性成熟的雌性小鼠的表皮细胞和卵细胞；供体细胞孵育步骤：以重编程因子分别与所述表皮细胞和所述卵细胞共培养，在‑8到‑5℃的条件下孵育12‑16min；细胞融合步骤：将所述卵细胞去核得到去核卵细胞，取出所述表皮细胞的细胞核注入所述去核卵细胞，并用融合液处理，得到胚胎源细胞；胚胎细胞培养步骤：将所述胚胎源细胞在含有培养基的培养瓶中培养；胚胎细胞筛选步骤：在超净工作台内，用体视显微镜筛选检查，找到合适的胚胎细胞，将所述胚胎细胞用胚胎混合液清洗。
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- 李光鹏 - 内蒙古大学
- 2010-07-29 - 2012-02-08 - C12N15/877
- 本发明公开了一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂在培育克隆胚胎或转基因胚胎中的应用。所述培育克隆胚胎或转基因克隆胚胎，包括如下步骤：1)将离体的供体细胞与离体的去核卵融合得到重构胚；2)将所述重构胚进行体外激活，所述方法还包括步骤1)和步骤2)之间的TSA处理，所述TSA处理包括以下步骤：将所述步骤1)的重构胚移入含组蛋白去乙酰化酶抑制剂的胚胎培养液中培养1-6小时。实验证明：TSA处理激活前的重构胚可使染色体保持完整性，保证了移入核的遗传物质的完整性，并且TSA处理后，胚胎发育质量得到提高(7天囊胚细胞数从87.6提高到111.3)。
- 一种培育克隆动物或转基因克隆动物的方法-201010241156.0
- 李光鹏 - 内蒙古大学
- 2010-07-29 - 2012-02-08 - C12N15/877
- 本发明公开了一种培育克隆动物或转基因克隆动物的方法。本发明还提供一种培育克隆动物胚胎或转基因克隆动物胚胎的方法。本发明提供的上述方法包括如下步骤：1)获得去核卵母细胞，2)将供体细胞与所述去核卵母细胞融合得到重构胚，3)将所述重构胚进行体外激活，4)将激活的重构胚进行培养，其特征在于：步骤3)中，所述体外激活包括将所述重构胚用钙离子激活剂进行2次以上的处理，然后将处理过的重构胚在蛋白合成抑制剂或蛋白质磷酸化抑制剂中激活，得到重构胚。实验证明：采用以上技术方案后，克隆牛的7个月的妊娠率、发育到期率、出生后存活率分别为44％、33％和100％。
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