[发明专利]一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法

摘要

本发明公开了一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，包括以下步骤：1)富集：取1～5g柑橘园土样加入装有50～100ml富集培养基的三角瓶中；2)筛选：取富集后的培养液多份，将稀释后不同浓度的菌悬液分别涂布于初筛平板上；从初筛平板上挑取形态不同的菌落，在PDA斜面培养基中划线，做好记号，进行保种；从斜面上挑取孢子或菌丝接种到不同的发酵培养基中，摇瓶发酵，取发酵液，测定发酵液中的原果胶酶酶活，筛选出酶活最高的菌株；3)酶液制备：将筛出的菌株接种至优化培养基中，取所得的培养物，离心处理，得到的上清液即为原果胶酶液，采用本发明制备的复合酶液进行果胶提取，果胶几乎没有降解，能够降低环境污染。

主权项

一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)富集：取1～5g柑橘园土样加入装有50～100ml富集培养基的三角瓶中，富集培养24～48h，温度为30℃，转速为200r/min；2)筛选：取富集后的培养液多份，分别稀释为10^‑3～10^‑5，将稀释后不同浓度的菌悬液分别涂布于初筛平板上，培养2～5天，温度为30～37℃；从初筛平板上挑取形态不同的菌落，在PDA斜面培养基中划线，做好记号，进行保种，培养2～5天，温度为30～37℃；从斜面上挑取孢子或菌丝接种到不同的发酵培养基中，摇瓶发酵24～48h，温度为30～37℃，转速为200r/min，取发酵液，测定发酵液中的原果胶酶酶活，筛选出酶活最高的菌株；3)酶液制备：将筛出的菌株接种至优化培养基中，优化培养基(g/l)的组分及配比为：柑橘皮渣25～33、硝酸钠2～5、氯化钾0.1～0.5、磷酸氢二钾0.5～2、七水硫酸镁0.5～1.0、七水硫酸亚铁0.01～0.05，余量为蒸馏水，培养条件：装液量为50～100ml/250ml，接种量为2～5％，温度为25～35℃，转速为200～400r/min，培养时间为24～72h，取所得的培养物，在0～4℃、8000～12000r/min转速条件下，离心5～10min，得到的上清液即为原果胶酶液，将原果胶酶液在‑20℃条件下低温保存。