[发明专利]一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法

权利要求书

1.一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)富集：取1～5g柑橘园土样加入装有50～100ml富集培养基的三角瓶中，富集培养24～48h，温度为30℃，转速为200r/min；

2)筛选：取富集后的培养液多份，分别稀释为10^-3～10^-5，将稀释后不同浓度的菌悬液分别涂布于初筛平板上，培养2～5天，温度为30～37℃；从初筛平板上挑取形态不同的菌落，在PDA斜面培养基中划线，做好记号，进行保种，培养2～5天，温度为30～37℃；从斜面上挑取孢子或菌丝接种到不同的发酵培养基中，摇瓶发酵24～48h，温度为30～37℃，转速为200r/min，取发酵液，测定发酵液中的原果胶酶酶活，筛选出酶活最高的菌株；

3)酶液制备：将筛出的菌株接种至优化培养基中，优化培养基(g/l)的组分及配比为：柑橘皮渣25～33、硝酸钠2～5、氯化钾0.1～0.5、磷酸氢二钾0.5～2、七水硫酸镁0.5～1.0、七水硫酸亚铁0.01～0.05，余量为蒸馏水，培养条件：装液量为50～100ml/250ml，接种量为2～5％，温度为25～35℃，转速为200～400r/min，培养时间为24～72h，取所得的培养物，在0～4℃、8000～12000r/min转速条件下，离心5～10min，得到的上清液即为原果胶酶液，将原果胶酶液在-20℃条件下低温保存。

2.根据权利要求1所述的一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于：所述步骤1)中的富集培养基的组分为酵母提取物、蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、氯化钙。

3.根据权利要求1所述的一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于：所述步骤2)中筛选出的菌株为曲霉属或青霉属菌株。

4.根据权利要求3所述的一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于：步骤3)中的优化培养基(g/l)的组分及配比为：柑橘皮渣26.3、硝酸钠3.3、氯化钾0.1、磷酸氢二钾0.5、七水硫酸镁0.5、七水硫酸亚铁0.01，余量为蒸馏水，培养条件：装液量为50ml/250ml，接种量为2％，温度为28℃，转速为200r/min，培养时间为36h。

5.根据权利要求3所述的一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于：步骤3)中的优化培养基(g/l)的组分及配比为：柑橘皮渣28.6、硝酸钠2.5、氯化钾0.2、磷酸氢二钾0.7、七水硫酸镁0.7、七水硫酸亚铁0.01，余量为蒸馏水，培养条件：装液量为75ml/250ml，接种量为1.5％，温度为30℃，转速为200r/min，培养时间为72h。

6.根据权利要求1所述的一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于：所述步骤2)中的菌悬液直接由腐烂水果的腐烂部分用无菌水浸泡后得到。

7.根据权利要求6所述的一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于：所述腐烂水果为腐烂的橙子，步骤2)中筛选出的菌株为青霉菌株，步骤3)中的优化培养基(g/l)的组分及配比为：柑橘皮渣30.6、硝酸钠2.2、氯化钾0.5、磷酸氢二钾2、七水硫酸镁0.5、七水硫酸亚铁0.01，余量为蒸馏水；培养条件：装液量为50ml/250ml，接种量为4.5％，温度为30℃，转速为300r/min，培养时间为60h。

8.根据权利要求6所述的一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，其特征在于：所述腐烂水果为腐烂的芦柑，步骤2)中筛选出的菌株为黑曲霉菌株，步骤3)中的优化培养基(g/l)的组分及配比为：柑橘皮渣30.1、硝酸钠3.5、氯化钾0.2、磷酸氢二钾0.55、七水硫酸镁0.75、七水硫酸亚铁0.02，余量为蒸馏水；培养条件：装液量为75ml/250ml，接种量为2％，温度为28℃，转速为200r/min，培养时间为48h。