[发明专利]一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法

说明书

本发明公开了一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，包括以下步骤：1)富集：取1～5g柑橘园土样加入装有50～100ml富集培养基的三角瓶中；2)筛选：取富集后的培养液多份，将稀释后不同浓度的菌悬液分别涂布于初筛平板上；从初筛平板上挑取形态不同的菌落，在PDA斜面培养基中划线，做好记号，进行保种；从斜面上挑取孢子或菌丝接种到不同的发酵培养基中，摇瓶发酵，取发酵液，测定发酵液中的原果胶酶酶活，筛选出酶活最高的菌株；3)酶液制备：将筛出的菌株接种至优化培养基中，取所得的培养物，离心处理，得到的上清液即为原果胶酶液，采用本发明制备的复合酶液进行果胶提取，果胶几乎没有降解，能够降低环境污染。

技术领域

本发明涉及生物发酵技术领域，具体为一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法。

背景技术

柑橘无论是鲜食还是加工，皮是其主要副产物，约占果实重的20％～40％，皮中的果胶含量达20％～30％，是商品化果胶的重要原料。从柑橘皮中提取果胶不仅具有很大的经济价值，而且对提高柑橘资源的综合利用率，减少环境污染，保持我国柑橘产业的可持续发展具有重大意义。果胶是食品工业上重要的食品添加剂，需求量逐年递增。商品化的果胶主要还是以酸提法为主，但该方法具有诸多不足。残渣分离困难，设备易被腐蚀，能源消耗很大，同时还产生大量酸性废弃物对环境造成污染等。目前，提取果胶的物理方法主要有，超声波法、高压灭菌法、压榨法和亚临界水萃取法等，物理法比较简单高效，但能耗高，难以工业化应用。

酶法提果胶也得到了普遍的关注，酶法提果胶反应条件温和，污染低，而且能耗小。微生物酶法提取果胶的研究越来越多，但得到的果胶的产率和质量还需要进一步提高。但目前报道的酶法得到的果胶的质量差、提取率低，故寻找一种能够高效提取果胶的酶势在必行。原果胶的降解是多种酶共同作用的结果，主要包括内切聚半乳糖醛酸酶、果胶(酸)裂解酶、果胶甲酯酶、聚阿拉伯糖苷酶和聚鼠李半乳糖醛酸酶。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法，包括以下步骤：

1)富集：取1～5g柑橘园土样加入装有50～100ml富集培养基的三角瓶中，富集培养24～48h，温度为30℃，转速为200r/min；

2)筛选：取富集后的培养液多份，分别稀释为10^-3～10^-5，将稀释后不同浓度的菌悬液分别涂布于初筛平板上，培养2～5天，温度为30～37℃；从初筛平板上挑取形态不同的菌落，在PDA斜面培养基中划线，做好记号，进行保种，培养2～5天，温度为30～37℃；从斜面上挑取孢子或菌丝接种到不同的发酵培养基中，摇瓶发酵24～48h，温度为30～37℃，转速为200r/min，取发酵液，测定发酵液中的原果胶酶酶活，筛选出酶活最高的菌株；

3)酶液制备：将筛出的菌株接种至优化培养基中，优化培养基(g/l)的组分及配比为：柑橘皮渣25～33、硝酸钠2～5、氯化钾0.1～0.5、磷酸氢二钾0.5～2、七水硫酸镁0.5～1.0、七水硫酸亚铁0.01～0.05，余量为蒸馏水，培养条件：装液量为50～100ml/250ml，接种量为2～5％，温度为25～35℃，转速为200～400r/min，培养时间为24～72h，取所得的培养物，在0～4℃、8000～12000r/min转速条件下，离心5～10min，得到的上清液即为原果胶酶液，将原果胶酶液在-20℃条件下低温保存。

优选的，所述步骤1)中的富集培养基的组分为酵母提取物、蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、氯化钙。

优选的，所述步骤2)中筛选出的菌株为曲霉属或青霉属菌株。