[发明专利]一种基于负电荷膜浓缩检测食品中诺如病毒的方法

摘要

本发明公开了一种基于负电荷膜浓缩检测食品中诺如病毒的方法，所述方法为将待测样品用洗脱液浸泡，室温振荡洗脱，离心，获得上清液；取上清液调节pH值至2～4，采用孔径为0.45μm负电荷滤膜抽滤，获得抽滤后的滤纸；将抽滤后的滤纸剪碎，提取RNA进行实时荧光定量PCR反应，获得待测样品Ct值，根据诺如病毒NoV GI标准曲线和诺如病毒NoV GII标准曲线，最终获得待测样品中诺如病毒含量。本发明与现有地方标准(DBS13/001‑2015)相比不仅省时、高效；而且病毒浓缩率也可提高5‑10％。

主权项

一种基于负电荷膜浓缩检测食品中诺如病毒的方法，其特征在于所述方法为：(1)病毒洗脱：将待测样品用洗脱液浸泡，室温振荡洗脱，离心，获得上清液；所述待测样品为新鲜蔬菜、水果、沙拉或肉类熟食，若待测样品为水果，则向洗脱液中加入果胶酶和纤维素酶；所述洗脱液为下列之一：洗脱液BE、洗脱液ALK、洗脱液SPE或洗脱液GE；所述洗脱液BE组成为：三羟甲基氨基甲烷12.11g/L，甘氨酸3.75g/L，牛肉浸膏10‑30g/L，溶剂为ddH2O，pH＝9.5；所述洗脱液GE组成为：甘氨酸3.75g/L，NaCl 8.775g/L，溶剂为ddH2O，pH＝9.5；所述洗脱液ALK组成为：KH2PO46.8g/L，NaCl 58.5g/L，Trinton X‑1001mL/L，溶剂为ddH2O，pH＝9.2；所述洗脱液SPE组成为：NaHCO3 84g/L，大豆蛋白10‑20g/L，溶剂为ddH2O，pH＝9.3；(2)病毒浓缩：取上清液调节pH值至2～4，采用孔径为0.45μm负电荷滤膜抽滤，获得抽滤后的滤纸；(3)病毒浓度检测：将抽滤后的滤纸剪碎，提取RNA进行实时荧光定量PCR反应，获得待测样品Ct值，根据诺如病毒NoV GI标准曲线和诺如病毒NoV GII标准曲线，最终获得待测样品中诺如病毒含量；所述诺如病毒NoV GI标准曲线以1.27～1.27×105PCRU/mL诺如病毒NoV GI标准品浓度为纵坐标，以实时荧光定量PCR的Ct值为横坐标制作而成，所述诺如病毒NoV GII标准曲线以0.86～0.86×108PCRU/mL诺如病毒NoV GII标准品浓度为纵坐标，以实时荧光定量PCR的Ct值为横坐标制作而成。