[发明专利]一种水蛭提取物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种水蛭提取物的制备方法：将水蛭加水匀浆后，经可控酶解、有机溶剂沉淀、超滤、阴离子交换层析制得水蛭提取物。该水蛭提取物可用于制备具有抗凝作用、溶栓作用、抑制血小板聚集作用及神经保护作用的药物。本发明从中药现代化的技术要求出发，采用可控酶解技术提取水蛭中的肽类成分，结合生物制药技术，采用超滤、凝胶层析的分离技术进一步进行纯化，得到了比传统水蛭提取物纯度更高、活性更强的提取物。该方法突破了传统动物药在提取、分离方面的瓶颈，解决了传统动物药以原粉应用时用量大、味道腥臭的问题。

主权项

1.一种水蛭提取物的制备方法，其特征在于：步骤如下：(1)取水蛭干燥全体粉碎成30～120目粉末，加入8～15倍量的水，或取水蛭鲜活全体，加入1～5倍量的水，匀浆；(2)取匀浆液，调整pH至7～9，按每1g底物加入2000～20000U酶的比例加入胰蛋白酶或/和胰酶，控制温度30℃～60℃，酶解2～12小时，冷却至室温；(3)向上述酶解液中加入1～5倍体积的乙醇或/和丙酮冷藏沉淀1～2次，过滤，取滤液减压回收，残渣加水溶解，微孔滤膜过滤；(4)将上述滤液通过分子截留量为5000Da的超滤膜，收集分子量小于5000Da的部分；(5)将上述超滤液的pH调整至7.5～9.5，通过阴离子交换树脂，先用水或pH7～9、0.01～0.05mol/L的Tris-盐酸缓冲液或pH7～9、0.01～0.05mol/L的二乙醇胺-盐酸缓冲液冲洗，将冲洗液弃去，然后以0.1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液，脱盐，浓缩，喷雾干燥或冷冻干燥即得到水蛭提取物。