[发明专利]一种高通量测量间充质干细胞数量的方法

摘要

本发明涉及一种高通量测量间充质干细胞数量的方法，步骤如下：⑴标准品选择、⑵样本制备、⑶样本阳性对照品的制备、⑷空白对照品制备、⑸加样、⑹测量、⑺结果有效性判断、⑻结果计算。本发明能够减少人为误差：使用常规计数方法时，往往因为机器要求或者人工计数要求等问题需要将样本进行高倍数的稀释，而高倍数的稀释易造成较大误差，本方法可直接取样进行检测，避免高倍数稀释从而减少实验误差。

主权项

1.一种高通量测量间充质干细胞数量的方法，其特征在于：步骤如下：⑴标准品选择：利用标准间充质干细胞溶液，使用PBS为溶剂，制备标准间充质干细胞标准曲线；⑵样本制备：取1mL待测细胞样本，加入至1.5mL离心管中，300g离心5分钟；弃去上清液，向沉淀细胞中加入PBS至1mL，反复吹打混匀；⑶样本阳性对照品制备：取1mL待测细胞样本，加入至1.5mL离心管中，300g离心5分钟；弃去上清液，向沉淀细胞中加入步骤⑴中最低浓度的标准品溶液1mL，反复吹打混匀；⑷空白对照品制备：取上述步骤⑵制成的样本1mL，300g离心5分钟，取上清液做空白对照品备用；⑸加样：分别取制备好的空白对照品、样本阳性对照品、标准品和样本各200μL，加入至96孔板中，每例各做一个复孔；⑹测量：使用酶标仪或紫外分光光度计，选择360nm波长对样本进行检测；⑺结果有效性判断：重复实验吸光度值的CV值应小于5％；相关系数R2应大于0.980；实验方成立；⑻结果计算：矫正系数的计算：按以下公式计算矫正系数λ＝A标/(A阳‑A样)上式中：λ为矫正系数A标＝最低浓度标准品的吸光度值A阳＝样本阳性对照品的吸光度值A样＝样本的吸光度值标准曲线制备：以5个标准品的吸光度检测结果为纵坐标，标准品细胞密度为横坐标，制出线性方程；样本结果计算：将未知样本和空白对照品的吸光度值代入线性方程，求出细胞密度，计算未知样本和空白对照品的细胞密度差值，再乘以矫正系数即为样本的的细胞密度。