[发明专利]一种提高酿酒酵母异戊二烯合成能力的方法有效
| 申请号： | 201610900577.7 | 申请日： | 2016-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN106399139B | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 于洪巍;叶丽丹;王凡 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12P5/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 杭州裕阳联合专利代理有限公司 33289 | 代理人： | 姚宇吉 |
| 地址： | 310000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，通过酶切连接将来源于银白杨的IspS基因序列SEQ ID NO:1克隆到质粒上，转化到酿酒酵母体内，以实现在酿酒酵母中合成异戊二烯；通过GAL4过表达增强异戊二烯合成酶基因(IspS)的转录水平,并通过定向进化提高异戊二烯合成酶的催化活性。将两者结合起来，使异戊二烯的产量提高到原来的8.2倍。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 酿酒 酵母 异戊二烯 合成 能力 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，其特征在于：通过酶切连接将来源于银白杨的定向进化的IspS基因序列克隆到质粒上，转化到酿酒酵母体内，以实现在酿酒酵母中合成异戊二烯；并通过GAL4过表达和IspS定向进化分别增强IspS的转录水平和活性，以实现提高酿酒酵母合成异戊二烯的能力；所述GAL4过表达为通过DNA同源重组，将含有GAL4表达盒的线性化质粒整合到酿酒酵母基因组上GAL1/7/10区域，敲除GAL1/7/10基因，同时增强GAL4的表达，以实现增强IspS的转录水平；所述定向进化的IspS氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。
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