[发明专利]一种小分子骨多肽的分离方法

摘要

本发明公开了一种小分子骨多肽的分离方法，利用疏水型分子筛吸附技术和纳滤膜分离技术分离小分子多肽，包括以下步骤：(1)动物骨骼的粉碎清洗；(2)动物骨骼脱脂，加工成过80‑100目筛的粉剂；（3）骨粉100℃条件下蒸煮完成后加入粗胰酶预水解，再加入木瓜蛋白酶再次水解；(4)制备疏水型酶解后的小分子骨多肽经过分子筛提取和纳滤提纯技术，最终得到分子量在200‑2000 Da骨多肽。

主权项

一种小分子骨多肽的分离方法，包括以下步骤：A、小分子骨多肽的制备： (1) 动物骨骼的破碎与清洗：采用碎骨机将动物骨骼破碎，自动清洗装置进行清洗；(2) 动物骨骼的脱脂：将破碎、清洗过的动物骨骼进行脱脂处理，然后干燥，加工成过80‑100目筛的粉剂，得到骨粉； (3) 将骨粉加入酶解罐中，加入蒸馏水，按重量比，骨粉：蒸馏水=1:16 – 20，100℃下蒸煮4 h，待温度降低至55℃后，调节溶液pH值到7.5，加入粗胰蛋白酶8000 U/g，在温度55℃、pH = 7.5的条件下酶解4 h，然后100℃灭酶20 min，待温度降到50℃时，调节pH到6.0，加入木瓜蛋白酶5000 U/g，继续酶解4 h，酶解成小分子骨多肽；B、小分子骨多肽的分离： (1) 疏水型Ts微孔分子筛的制备：称取已有的亲水型Ts微孔分子筛加入圆底烧瓶中，向里面加入分子筛的4.0体积倍量甲苯，开启磁力搅拌，随后用恒压滴液漏斗向里面加入分子筛的3.0体积倍量十六烷基三甲基氯硅烷，搅拌均匀后，150℃下搅拌6 h，反应完后，离心，超声下乙醇清洗3次，每次用量是分子筛的2.5体积倍量，放入150℃的烘箱烘干，研磨，最后得到疏水型Ts微孔分子筛； (2) 在酶解后的溶液中加入疏水型Ts微孔分子筛，搅拌吸附，吸附时间20‑40min，过40目筛截留分子筛，随后对截留后的分子筛用4.0体积倍量的95%乙醇进行解吸附，分子筛放置在150℃进行再生，并把得到的粗提液通过纳滤技术除去无机盐和氨基酸，进一步得到纯度较高的小分子骨多肽，最后减压蒸馏喷雾干燥得到小分子骨多肽；其中，疏水性Ts微孔分子筛的孔径0.6‑1.0 nm，加入量为骨粉质量的10%‑30%；所述纳滤技术是将粗提液通过截留分子量是200Da的螺旋卷式纳滤膜，操作压力是400‑600 Psi，进水流量3‑5 m3/h，进水温度30‑40℃。