[发明专利]一种CAR‑T细胞冻存介质及冻存方法

摘要

本发明公开了一种CAR‑T细胞冻存介质及冻存方法，属于细胞治疗技术领域。一种CAR‑T细胞冻存方法，包括以下步骤(1)将培养的CAR‑T细胞在200‑500g条件下，离心，弃上清液；(2)细胞团用DPBS重悬，在磁力架上静止，细胞跟磁珠分离；(3)将细胞悬液转移至新的离心管中，重复去磁珠；(4)将细胞悬液离心，弃掉上清液；(5)根据需要冻存的细胞总数量，将细胞重悬于冻存介质中；(6)将细胞分装于冻存管或者冻存袋中，程序降温；降温结束后，转移至液氮中长期保存。本发明的优点是，对细胞保护效果明显，解冻后可直接回输人体，并且具有高活细胞率和杀伤率。

主权项

一种CAR‑T细胞冻存方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将培养的CAR‑T细胞转移至离心管中，在200‑500g条件下，离心5‑8min，弃掉上清液；(2)将离心后的细胞团先用DPBS重悬，确认细胞团被完全打碎，在磁力架上静止2‑5分钟，实现细胞跟磁珠的分离；(3)用移液管将细胞悬液转移至新的离心管中，重复去磁珠操作两次；(4)将清除磁珠后的细胞悬液在200‑500g条件下，离心5‑8min，弃掉上清液，备用；(5)根据需要冻存的细胞总数量，计算冻存介质的体积，将细胞重悬于冻存介质中；(6)将细胞分装于冻存管或者冻存袋中，放置于‑80℃超低温冰箱中缓慢冷冻8‑18小时，或者放置于程序降温仪中按照相应程序降温至‑85℃；降温结束后，将细胞冻存管或者冻存袋转移至液氮中长期保存。