[发明专利]一种CAR‑T细胞冻存介质及冻存方法

权利要求书

1.一种CAR-T细胞冻存方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将培养的CAR-T细胞转移至离心管中，在200-500g条件下，离心5-8min，弃掉上清液；

(2)将离心后的细胞团先用DPBS重悬，确认细胞团被完全打碎，在磁力架上静止2-5分钟，实现细胞跟磁珠的分离；

(3)用移液管将细胞悬液转移至新的离心管中，重复去磁珠操作两次；

(4)将清除磁珠后的细胞悬液在200-500g条件下，离心5-8min，弃掉上清液，备用；

(5)根据需要冻存的细胞总数量，计算冻存介质的体积，将细胞重悬于冻存介质中；

(6)将细胞分装于冻存管或者冻存袋中，放置于-80℃超低温冰箱中缓慢冷冻8-18小时，或者放置于程序降温仪中按照相应程序降温至-85℃；降温结束后，将细胞冻存管或者冻存袋转移至液氮中长期保存。

2.根据权利要求1所述的一种CAR-T细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤5中的冻存介质由氯化钠、二甲基亚砜、葡萄糖、人血白蛋白、低分子葡聚糖和RPMI-1640基础培养基组成，其中氯化钠的质量浓度为0.45～0.9％，二甲基亚砜溶液的体积浓度为5～15％，葡萄糖的质量浓度为5～20％、人血白蛋白的质量浓度为10～50％，低分子葡聚糖的质量浓度为5～20％。

3.根据权利要求2所述的一种CAR-T细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤5中的冻存介质，其中氯化钠的质量浓度为0.9％，二甲基亚砜溶液的体积浓度为10～15％，葡萄糖的质量浓度为5～10％、人血白蛋白的质量浓度为10～30％，低分子葡聚糖的质量浓度为5～10％。

4.根据权利要求3所述的一种CAR-T细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤5中的冻存介质，其中氯化钠的质量浓度为0.9％，二甲基亚砜溶液的体积浓度为10％，葡萄糖的质量浓度为5％，人血白蛋白的质量浓度为10％，低分子葡聚糖的质量浓度为5％。

5.根据权利要求3所述的一种CAR-T细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤5中CAR-T细胞的冻存密度为1×10⁶/ml～500×10⁶个/ml。

6.一种CAR-T细胞的冻存介质，其特征在于：由氯化钠、二甲基亚砜、葡萄糖、人血白蛋白、低分子葡聚糖和RPMI-1640基础培养基组成，其中氯化钠的质量浓度为0.45～0.9％，二甲基亚砜溶液的体积浓度为5～15％，葡萄糖的质量浓度为5～20％、人血白蛋白的质量浓度为10～50％，低分子葡聚糖的质量浓度为5～20％。

7.根据权利要求6所述的一种CAR-T细胞的冻存介质，其特征在于：所述氯化钠的质量浓度为0.9％，二甲基亚砜溶液的体积浓度为10～15％，葡萄糖的质量浓度为5～10％、人血白蛋白的质量浓度为10～30％，低分子葡聚糖的质量浓度为5～10％。

8.根据权利要求7所述的一种CAR-T细胞的冻存介质，其特征在于：所述氯化钠的质量浓度为0.9％，二甲基亚砜溶液的体积浓度为10％，葡萄糖的质量浓度为5％，人血白蛋白的质量浓度为10％，低分子葡聚糖的质量浓度为5％。

9.一种CAR-T细胞的冻存制剂，其特征在于：由CAR-T细胞和权利要求6-8中任何一项所述的CAR-T细胞的冻存介质组成。

10.根据权利要求9所述的一种CAR-T细胞的冻存制剂，其特征在于：所述CAR-T细胞的冻存密度为1×10⁶/ml～500×10⁶/ml。