[发明专利]一种青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA的克隆方法在审
| 申请号： | 201610715468.8 | 申请日： | 2016-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN107779449A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 杨美宁 | 申请（专利权）人： | 杨美宁 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/54 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 741000 甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 一种青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA的克隆方法，一种青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA的克隆方法，DNA的提取，按植物DNA提取试剂盒说明书提取青蒿植株的DNA。RNA的提取，PCR 扩增以提取的青蒿DNA为模板，SSPri5、SSPri3为上下游引物，用Takara公司的One Shot LA PCR Mix扩增，扩增条件为94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30个循环→72℃，10min→4℃RTPCR扩增以提取的青蒿RNA为模板，转化DH5α感受态细胞，涂板，蓝白斑筛选重组子。分别经PCR扩增和EcoRⅠ酶切进行鉴定。PCR扩增采用Promega公司的Tf1酶，反应条件为94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30个循环→72℃，10min→4℃。最后在 ABI Prism310DNA测序仪上用T7启动子引物测序。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 青蒿 鲨烯合酶 基因 及其 cdna 克隆 方法 | ||
【主权项】：
一种青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA的克隆方法， PCR 扩增以提取的青蒿DNA为模板，SSPri5、SSPri3为上下游引物，用Takara公司的One Shot LA PCR Mix扩增，扩增条件为： 94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30个循环→72℃，10min→4℃RTPCR扩增以提取的青蒿RNA为模板，转化DH5α感受态细胞，涂板，蓝白斑筛选重组子;分别经PCR扩增和EcoRⅠ酶切进行鉴定;PCR扩增采用Promega公司的Tf1酶，反应条件为：94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30个循环→72℃，10min→4℃;最后在 ABI Prism310DNA测序仪上用T7启动子引物测序。
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