[发明专利]一种培育大黄鱼苗种的方法及其所使用的筛选分子标记

摘要

本发明涉及一种培育大黄鱼苗种的方法及其所使用的筛选分子标记，包括如下依次进行的步骤：1)筛选大黄鱼生长轴相关基因及其连锁SSR；2)引物合成；3)SSR引物扩展多态性检测；4)生长相关SSR标记筛选；5)大黄鱼亲鱼的标记与筛选；6)大黄鱼苗种培育。该发明克服了现有技术中缺乏快速筛选和培育优质大黄鱼苗种的缺点，具有快速、便捷、有效、能加速大黄鱼育种进程的优点。

主权项

1.一种培育大黄鱼苗种的方法，其特征在于：包括如下依次进行的步骤：1）筛选大黄鱼生长轴相关基因及其连锁SSR：根据已报道的其他物种的生长相关基因和已公布的大黄鱼全基因遗传信息，在基因数据库中筛选大黄鱼生长轴相关基因，并获取基因主要调控区，筛选出携带有重复序列SSR标记的大黄鱼生长轴相关功能基因；2）引物合成：对步骤1）筛选的大黄鱼生长轴相关基因的连锁SSR序列进行引物设计，并合成SSR引物；3）SSR引物扩展多态性检测：用步骤2）所合成的SSR引物对随机挑选大黄鱼随机群体DNA样本进行PCR扩增及电泳检测，筛选得到扩展结果呈现多态性的SSR引物，其中每对SSR引物多态性中表现出单一条带的基因型命名为AA型，表现出多条带的基因型命名为AB型，每对SSR引物各有AA、AB两种基因型；4）生长相关SSR标记筛选：用步骤3）中筛选出的SSR引物对随机挑选大黄鱼随机群体DNA样本进行PCR扩增及电泳检测，根据PCR扩增检测结果，统计不同引物基因型及基因型组合方式对应的大黄鱼样本数量及平均体重，筛选出以下体重比所有样本平均体重重且具有显著性差异P＜0.05的引物基因型组合：引物ghr2 AA型、引物igf2‑4 AA型、引物igf1‑10 AB型、引物igf1‑11 AB型的引物基因型组合，以上引物基因型组合须依次使用以进行筛选；其中，引物序列如下：引物igf1‑11： 上游序列：5'  CGCCGACCATAGAAACACTC      3'             下游序列：5'  GGCATCTTCACGTTGTCAAAT     3'引物ghr2：    上游序列：5'  CTTTCTTTGTTTCTGCTGGACT    3'             下游序列：5'  CTGACTACTGGATGGCTCTAATG   3'引物igf2‑4：  上游序列：5'  GACTATCTGTGCTGTCTGTGGC    3'             下游序列：5'  CTCTTGGGGTGCTATTACTTTACT  3'引物igf1‑10： 上游序列：5'  AGCCCTACCAAGGTCTGTCT      3'             下游序列：5'  CGTGGGATTTGTCCTTAGTTAC    3'5）大黄鱼亲鱼的标记与筛选：用步骤4）所筛选出的SSR标记引物基因型组合对大黄鱼亲鱼进行分子标记检测，筛选出携带目的基因型组合的大黄鱼亲鱼，用以培育子代大黄鱼苗；6）大黄鱼苗种培育：用步骤5）所筛选的大黄鱼亲鱼按照大黄鱼苗种培育技术规范进行子代大黄鱼苗的培育。