[发明专利]一种产(‑)γ‑内酰胺酶重组大肠杆菌的发酵方法

摘要

本发明提供了一种产(‑)γ‑内酰胺酶重组大肠杆菌的发酵方法，包括菌种的活化，菌株的活化及接种培养并通过种子的发酵罐培养进行发酵 最后通过离心的方式获得菌体，所述菌体的湿菌体达70g/L以上。本发明培养基成分简单，所用原料均为普通生物发酵原料；发酵过程时间短，10小时内基本发酵完毕发酵控制简单，拆分效果好。无需添加其他碳氮源，发酵过程稳定，易控制。

主权项

一种产(‑)γ‑内酰胺酶重组大肠杆菌的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、菌种的活化，从保存好的冷冻甘油管或冻干管中取出菌种，通过平板活化至平板上有单个菌株出现；S2、菌株的活化，将培养出的菌株进行活化；S3、菌株接种培养，将活化后的菌株接种于灭菌好后的摇瓶种子培养基中，在30‑37℃、100‑150转/min下，恒温震荡培养8‑12小时；S4、种子的发酵罐培养，按照发酵培养基的成分配置发酵罐，灭菌并降温(葡萄糖和硫酸镁单独灭菌)，待种子培养结束后通过火焰接种口接种进罐，初始进罐溶氧为100%，控制条件38‑42℃，通气量为1.5‑2vvm发酵罐培养，保持pH为6.8‑7.2，控制搅拌联动转速，保证溶氧不低于10%，转速控制不超过400转；S5、发酵开始后，流加葡萄糖，流加的速度保持3小时补完6g/L的葡萄糖为准；发酵至葡萄糖消耗完，溶氧上升；此时开始流加乳糖，流加速度控制为5小时补完10g/L的乳糖为准，发酵10小时后，放罐；S6、最后通过离心的方式获得菌体，所述菌体的湿菌体达70g/L以上。