[发明专利]一种益生菌抗菌家用纺织品抗菌性能的测试方法

摘要

本发明公开了一种益生菌抗菌家用纺织品抗菌性能的测试方法，包括如下步骤：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（8099）菌液培养和准备；试样准备；试样灭菌；试样装瓶；“0”接触时间振荡接触、稀释培养及菌落数测定；结果计算。本发明将试验样品及对照样品上放置于含有接种菌液的缓冲液中，通过培养试样将细菌食物链切断的作用机理，将其饿死，从而减少菌落数。在规定的温湿度条件下，以培养3天（大肠杆菌）和6天（金黄色葡萄球菌）后的抑菌率考察测试样品的抗菌性能。

主权项

一种益生菌抗菌家用纺织品抗菌性能的测试方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（8099）菌液培养和准备从3代—10代的细菌保存菌种试管斜面中取一接种环细菌，在营养琼脂平板上划线，进行培养，培养温度为36℃‑38℃，培养时间为18h—24h；用接种环从平板中挑出一个典型菌落，接种于20mL营养肉汤中，温度为36℃‑38℃，转速为130r/min，振荡培养18h—20h，即制成了接种菌悬液；菌液含量采用分光光度计法测定，活菌数应达到1*10⁹CFU/ml—5*10⁹CFU/ml,此新鲜菌液应在4h内尽快使用，以保证接种菌的活性；用吸管从细菌悬液中吸取2mL—3mL,即为金黄色葡萄球菌取上限，大肠杆菌取下限，移入装有9mL营养肉汤的试管中，充分混匀；吸取1ml移入另一支装有9mL营养肉汤的试管中，充分混匀；吸取1mL移入装有9mL0.03mol/L PBS缓冲液的试管中，充分混匀；吸取5mL移入装有45mL0.03mol/L PBS缓冲液的三角烧瓶中，充分混匀，稀释至含活菌数目3*10⁵CFU/mL—4*10⁵CFU/mL，由此固定的4次稀释程序，此接种菌液中含有微量的营养肉汤，用来对试样接种，此接种菌液应在4h内尽快使用，以保持接种菌的活性；（2） 试样准备将益生菌抗菌织物及其未处理对照试样分别剪成约5mm*5mm大小，称取0.75g±0.05g作为一份试样，用小纸片包好，根据实验需要称取多分试样，每份试样均用小纸片包好；（3） 试样灭菌将装有试样的小纸包放入高压灭菌锅，于121℃、103kPa灭菌15min备用；（4） 试样装瓶准备8个三角烧瓶，在其中4个烧瓶中各加入一份益生菌抗菌织物，4个烧瓶中各加入未处理对照样一份，然后在每个烧瓶中个加入70m L±0.1m L 0.03mol/L PBS缓冲液；（5）“0”接触时间振荡接触、稀释培养及菌落数测定用吸管往8个试样烧瓶中各加入5ml接种菌液，盖好瓶塞，再将此8个烧瓶置于恒温振荡器上，在24℃±1℃，以100r/min—150r/min，振荡1min±5s后，从每个烧瓶中吸取1mL±0.1mL试液，移入装有9mL±0.1mL 0.03mol/L PBS缓冲液的试管中，充分混匀；用10倍稀释法再进行1次稀释，充分混匀；用吸管从每个稀释倍数的试管中分别吸取1mL±0.1mL移入灭菌的平皿，倾注营养琼脂培养基15mL，每个稀释倍数的试管分别吸液制作两个平板进行计数，即二者的菌落数相差应在15%以内，否则数据无效，室温凝固，倒置平板，以37℃±1℃在益生菌处理面料上培养大肠杆菌72h，葡萄球菌144h，记录每个平板的菌落数；其中，未处理对照样接种“0”接触时间，稀释100倍平板中，菌落数控制在200CFU—250CFU之间，否则影响试验精确度；（6）结果计算以分离益生菌提取纯计数葡萄球菌为例，抑菌率按式（A.1）计算：Y=*100    （A.1）式中：Y——抑菌率，单位为%；A——6天后经益生菌整理样布上的金黄色葡萄球菌数，单位为（CFU/mL）；B——6天后未整理对照样布上的金黄色葡萄球菌数，单位为（CFU/mL）。