[发明专利]一种小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的LAMP快速检测方法

摘要

本发明提供了一种小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的LAMP快速检测方法，本发明利用GenBank公布的小麦1Dx5基因序列设计LAMP引物，建立了小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的LAMP检测体系，并对反应条件进行了优化。LAMP在引物FIP，BIP，F3，B3比例为0.8μM:0.8μM:0.1μM:0.1μM的25μL体系下，60℃反应60min为最佳反应条件，且LAMP引物能从供试的38份小麦材料中区分小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5。结果表明，建立的LAMP检测体系简单、快速、灵敏度好、特异性高，在小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5检测方面潜力巨大。

主权项

1.一种小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的LAMP检测方法，其特征在于，步骤如下：a）设计引物，引物序列为：引物序列（5'‑3'）SEQ IDF3AAGGGCAGCCATGGTACTNO:1B3GCCATTGTCCTGGTTGCT                                NO:2FIPACCCTGGTTGCCCTTGTCCTCAACTTCTCCGCAGGAGTC        NO:3BIPCTCCGTTGCAGCTAGGACAAGGTGTCCTCCTGGTTGTTGCAGAG     NO:4b）小麦基因组的提取：田间取小麦幼苗3‑5g，洗净，放入液氮冷冻后利用Cwbiotech植物基因组DNA提取试剂盒提取小麦苗基因组；紫外分光光度计Nanodrop 2000检测DNA提取质量和浓度，选取OD260/OD280检测值为1.7‑1.9的DNA样品用于LAMP扩增；c）LAMP扩增：对步骤b）得到的基因组进行LAMP扩增， LAMP体系反应温度为60℃；总体系25μL ：其中引物FIP，BIP，F3，B3的比例为0.8 μM: 0.8 μM: 0.1 μM: 0.1 μM，4 mM MgSO₄, 1.6 mM dNTPs, 0.8 M betaine, 1 μL Bst DNA polymerase；设置反应时间60 min；d）分析：对步骤c）得到的扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳或显色法分析；2%琼脂糖凝胶电泳出带状条带的为含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品，空白的为不含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品；显色法分析反应中有荧光的为含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品，没荧光的为不含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品。