[发明专利]一种快速制备黑米花青素矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法

摘要

本发明涉及从一种从黑米快速分离纯化黑米花青素矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的方法。具体操作如下：将黑米除杂，浸泡，超微粉碎成浆；恒温浸提；离心分离，得到水提液；然后利用Fe3O4纳米粒子纯化，用有机溶剂洗脱，洗脱液即为花青素的纯化液，将纯化液通过纳滤膜浓缩，回收有机溶剂，将浓缩液冷冻干燥，得到花青素粉末，再通过制备型高效液相色谱进一步分离，得到只含有矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的高纯度分离液；将分离液进行冷冻干燥，获得矢车菊素‑3‑葡萄糖苷粉末。本发明整个提取过程绿色、环保、无污染，纯化采用Fe3O4纳米粒子，洗脱试剂可以通过纳滤膜回收并循环使用；采用制备液相快速、高效分离纯化，最大程度地保留花青素单体不被破坏。

主权项

1.一种快速制备黑米花青素矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的方法，其特征在于具体的操作步骤如下：（1）除去黑米中的杂质，用水浸泡0.5～3小时；（2）将黑米和水按质量体积比1 Kg:10～20 L，进行超微粉碎，得到细浆料，所述细浆料中的物料的平均颗粒度小于50μm；（3）对浆料进行恒温浸提，用浓度0.5～5.0mol/l的柠檬酸溶液调节细浆料的pH为2.5～5.5，在20～55℃下，浸提2～6小时，得到黑米浆液；（4）碟片式离心机在6000～10000转/分钟下，对黑米浆液进行固液分离，除去淀粉、蛋白质、多糖，得到花青素水提液；（5）按体积质量比20～30ml：1g在花青素水提液中加入四氧化三铁（Fe3O4）纳米粒子，搅拌1小时以上，用磁铁将吸附有花青素的四氧化三铁（Fe3O4）纳米粒子吸出，用纯净水洗脱四氧化三铁（Fe3O4）纳米粒子表面不被其吸附的物质，再用有机溶剂洗脱，洗脱液即为花青素纯化液；（6）将花青素纯化液通过纳滤膜浓缩，所述纳滤膜为截留分子量为200～300Da的纳滤膜；浓缩压力为0.8 MPa、温度20～45℃；使体积浓缩到花青素纯化液体积的1/15，分别得到浓缩液和滤出液，滤出液即为步骤（5）所用有机溶剂；（7）将浓缩液进行预冷冻，然后在真空冷冻干燥机中，在真空度0.05～0.1MPa、温度‑20～‑40℃条件下冷冻干燥，获得水分含量≤5%的黑米花青素粉末；（8）将黑米花青素粉末用酸液复原成浓缩液，通过制备型高效液相色谱仪进一步分离，得到只含有矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的分离液；洗脱条件为：流动相A为体积浓度10%的甲酸，流动相B为按体积比25ml：10 ml：40 ml：25 ml的乙腈：甲酸：水：甲醇的混合溶液，采用C18柱梯度洗脱，流速为1ml/min，40～85min内流动相B由16%升至85%，检测波长为520nm；（9）将分离液真空冷冻干燥，真空冷冻干燥条件是真空度0.05～0.1MPa、温度‑20～‑40℃；获得水分含量≤5%的紫红色的矢车菊素‑3‑葡萄糖苷粉末，纯度可达到95%以上。