[发明专利]一种天然纤维素利用菌群的宏转录组RNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种天然纤维素利用菌群的宏转录组RNA的提取方法，属于生物技术领域。所述提取方法的主要步骤如下：(1)采用Qiazol裂解液预处理收集的菌体；(2)结合珠磨匀浆破壁裂解菌体；(3)氯仿:异戊醇抽提分离RNA；(5)异丙醇沉淀获得RNA；(6)乙醇洗涤纯化RNA。本发明通过加入Qiazol裂解液结合玻璃珠混合匀浆强化细胞破壁，不仅使微生物细胞壁尽可能破碎，RNA分子完全释放，同时有效保证了过程的可重复性，进而保证了提取的宏转录组RNA片段完整性、纯度和菌群结构完整性。

主权项

1.一种天然纤维素利用菌群的宏转录组RNA的提取方法，其特征在于，步骤如下：1)收取纤维素发酵液，在7800g下离心5min后，收集菌体；2)向步骤1)所得菌体中加入发酵液体积8％‑10％的Qiazol裂解液，并混合均匀，将混合液转移到裂解管中，利用珠磨进行匀浆处理，匀浆处理的时间为10s，转速为4M/s，循环次数为2次，再将所得匀浆液转移到DEPC水处理过的EP管中，所述Qiazol裂解液为Qiagen公司产品号为79306的裂解液；3)再向步骤2)的EP管内加入样品等体积的氯仿‑异戊醇混合液，摇匀后，在室温下放置2‑3min后，在4℃，15000g下离心15min；4)向步骤3)离心所得的水相中加入等体积的异丙醇，室温放置10min后，在4℃，8000～12000g下离心10min；5)向步骤4)离心所得上清液中加入70％体积的乙醇并混合均匀，在8000g下离心15s，取上清，重复2次，再用RNase‑free的DEPC水溶解，获得宏转录组RNA。