[发明专利]一种天然纤维素利用菌群的宏转录组RNA的提取方法

权利要求书

1.一种天然纤维素利用菌群的宏转录组RNA的提取方法，其特征在于，步骤如下：

1)收取纤维素发酵液，在7800g下离心5min后，收集菌体；

2)向步骤1)所得菌体中加入发酵液体积8％-10％的Qiazol裂解液，并混合均匀，将混合液转移到裂解管中，利用珠磨进行匀浆处理，匀浆处理的时间为10s，转速为4M/s，循环次数为2次，再将所得匀浆液转移到DEPC水处理过的EP管中，所述Qiazol裂解液为Qiagen公司产品号为79306的裂解液；

3)再向步骤2)的EP管内加入样品等体积的氯仿-异戊醇混合液，摇匀后，在室温下放置2-3min后，在4℃，15000g下离心15min；

4)向步骤3)离心所得的水相中加入等体积的异丙醇，室温放置10min后，在4℃，8000～12000g下离心10min；

5)向步骤4)离心所得上清液中加入70％体积的乙醇并混合均匀，在8000g下离心15s，取上清，重复2次，再用RNase-free的DEPC水溶解，获得宏转录组RNA。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤2)所述珠磨，含有直径为1.4mm的陶瓷珠，0.1mm的硅珠和4mm的玻璃珠。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤3)所述氯仿-异戊醇混合液，其中氯仿与异戊醇的比例为24:1。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤5)所述乙醇的体积浓度为70％。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)收取10ml天然纤维素发酵液，在7800g条件下离心处理5min后，收集菌体；

2)向步骤1)所得菌体中加入900μL的Qiagen公司产产品号为79306的Qiazol裂解液，混合均匀后，将混合液转移到裂解管中，利用珠磨进行匀浆处理，匀浆处理的时间为10s，转速为4M/s，循环次数为2次，再将所得匀浆液转移到DEPC水处理过的EP管中；所述珠磨含有直径为1.4mm的陶瓷珠，0.1mm的硅珠和4mm的玻璃珠；

3)再向步骤2)的EP管内加入样品等体积的氯仿-异戊醇混合液，摇匀后，在室温下放置2-3min后，在4℃，15000g下离心15min；所述氯仿-异戊醇混合液中氯仿与异戊醇的比例为24:1；

4)向步骤3)离心所得的水相中加入等体积的异丙醇，室温放置10min后，在4℃，8000～12000g下离心10min；

5)向步骤4)离心所得上清液中加入70％体积的乙醇并混合均匀，在8000g下离心15s，取上清，重复2次，再用RNase-free的DEPC水溶解，获得宏转录组RNA；所述乙醇为70％体积浓度的乙醇。

6.权利要求1-5任一项所述方法在提取天然菌群宏转录组RNA中的应用。