[发明专利]CIK细胞及其培养方法和应用

摘要

本发明公开了一种CIK细胞及其培养方法和应用。本发明CIK细胞培养方法包括如下步骤采集患者的外周血单个核细胞的步骤和将所述单个核细胞与抗CD3抗体、抗CD28抗体和细胞因子加入无血清培养基中进行诱导培养的步骤。本发明CIK细胞培养方法采用在抗CD28抗体和抗CD3抗体协同作用以提高刺激诱导单个细胞的刺激活性；采用含有细胞因子IL‑2和IL‑21联合诱导CIK细胞，使得该细胞因子的联合应用对淋巴细胞的扩增产生协同作用，提高CIK细胞的杀伤活性，且减少了因大剂量单因子应用所产生的毒副作用。而且，本发明实施例培养方法缩短了培养时间，降低培养成本，保证了CIK细胞的纯度。

主权项

一种CIK细胞培养方法，其特征在于，所述方法步骤如下：采集患者的外周血单个核细胞；将所述单个核细胞与抗CD3抗体、抗CD28抗体和细胞因子加入无血清培养基中进行诱导培养；所述诱导培养方法如下：第0天，在所述单个核细胞的悬液中添加重组人干扰素终浓度为1000U/ml，再将所述悬液转入抗CD3抗体和抗CD28抗体包被的细胞培养瓶中，并进行培养；所述重组人干扰素为重组人IFN‑γ；所述抗CD3抗体浓度为10μg/ml，抗CD28抗体浓度为10μg/ml；第1天，向所述细胞培养瓶中添加所述无血清培养基和含有IL‑1a、IL‑2、IL‑21细胞因子进行诱导培养；所述IL‑1a的终浓度为100U/ml，所述IL‑2的终浓度为500U/ml，所述IL‑21的终浓度为300U/ml；第2天，补充所述无血清培养基，并补充IL‑2、IL‑21，所述IL‑2的终浓度为500U/ml，所述IL‑21的终浓度为300U/ml；第4天，细胞计数并将细胞转移至细胞培养袋中扩大培养，此后每2‑3天根据细胞密度补加含有IL‑2、IL‑21的所述无血清培养基，所述IL‑2的终浓度为500U/ml，所述IL‑21的终浓度为300U/ml；直至培养第14天。