[发明专利]CIK细胞及其培养方法和应用

权利要求书

1.一种CIK细胞培养方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

采集患者的外周血单个核细胞；

将所述单个核细胞与抗CD3抗体、抗CD28抗体和细胞因子加入无血清培养基中进行诱导培养；所述诱导培养方法如下：

第0天，在所述单个核细胞的悬液中添加重组人干扰素终浓度为1000U/ml，再将所述悬液转入抗CD3抗体和抗CD28抗体包被的细胞培养瓶中，并进行培养；所述重组人干扰素为重组人IFN-γ；所述抗CD3抗体浓度为10μg/ml，抗CD28抗体浓度为10μg/ml；

第1天，向所述细胞培养瓶中添加所述无血清培养基和含有IL-1a、IL-2、IL-21细胞因子进行诱导培养；所述IL-1a的终浓度为100U/ml，所述IL-2的终浓度为500U/ml，所述IL-21的终浓度为300U/ml；

第2天，补充所述无血清培养基，并补充IL-2、IL-21，所述IL-2的终浓度为500U/ml，所述IL-21的终浓度为300U/ml；

第4天，细胞计数并将细胞转移至细胞培养袋中扩大培养，此后每2-3天根据细胞密度补加含有IL-2、IL-21的所述无血清培养基，所述IL-2的终浓度为500U/ml，所述IL-21的终浓度为300U/ml；直至培养第14天。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：在所述悬液中，第0天所述单个核细胞在所述悬液浓度为( 2-3 )×10⁶个/ml；

在第4天的培养中，控制所述单个核细胞的浓度为( 0 .5-1 .0 )×10⁶个/ml；

第4天后，每2-3天的培养中，控制所述单个核细胞的浓度为(1-2 )×10⁶个/ml。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述无血清培养基为KBM581。