[发明专利]一种外周血NK细胞的体外诱导扩增培养方法

摘要

本发明提供了一种外周血NK细胞的诱导扩增培养方法。本发明所述的外周血NK细胞的诱导扩增培养方法是通过应用细胞因子白介素‑2、白介素‑15、4‑1BBL和SCGM培养基联合培养外周血单个核细胞，前期白介素‑15和4‑1BBL孵育固定在细胞培养板上诱导激活单个核细胞中的少量NK细胞快速增殖，后期溶解性的白介素‑15和4‑1BBL诱导NK细大量快速增殖，然后收集培养的NK细胞进行细胞纯度和对肿瘤细胞杀伤作用的检测以确保NK细胞的抗肿瘤作用。本发明方法诱导培养过程简单易行，周期较短，成本低廉；获得率高，重复性好；培养后细胞活力好，获得的NK细胞数量和活力均能保证临床肿瘤免疫治疗的应用。

主权项

一种外周血NK细胞的体外诱导扩增培养方法，其特征在于，包括以下步骤：A.以常规技术制备人外周血单个核细胞；B.用红细胞裂解液重悬所收集的单个核细胞，裂解去除残存的红细胞；C.用38ml SCGM培养基重悬单核细胞，加入已灭活的自体血清2ml和2万单位重组人IL‑2，混匀后加入培养板中，置于37℃孵箱静置培养；所述培养板中已以固定好培养激活NK细胞所需的白介素‑15和4‑1BBL；D.第3天，补充20ml含有1‑2％自体血清的SCGM培养基及1万单位IL‑2、适量的白介素‑15和适量的4‑1BBL，混匀后继续培养；E.第4天，把培养板中的培养液转移到培养袋中继续培养，每3‑4天向培养袋中补充40ml含有1‑2％自体血清的SCGM培养基和2万单位IL‑2、适量的白介素‑15和适量的4‑1BBL，总共培养18天，可获得的NK细胞总数可达5.5×10⁹个，活细胞率约为90％，且其中NK细胞的纯度约为80％。