[发明专利]一种BMP-3蛋白及其作为骨修复注射剂的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201610183898.X | 申请日： | 2016-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN105837682A | 公开（公告）日： | 2016-08-10 |
| 发明（设计）人： | 宋富智;梁世昌;宋德顺 | 申请（专利权）人： | 天津中津生物发展有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/51 | 分类号： | C07K14/51;C12P21/06;C07K1/22;C07K1/34;A61L27/22;A61L27/24;A61L27/54 |
| 代理公司： | 北京安博达知识产权代理有限公司 11271 | 代理人： | 徐国文 |
| 地址： | 300385 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供了一种BMP‑3的提取及含BMP‑3的注射剂的制备方法。通过提取部分纯化的BMP‑3与胶原蛋白及PEG 2000，泊洛沙姆和PVP制得注射剂。本发明提供了一种以天然提取、部分纯化的BMP为基础并具有缓释作用的最佳载体的注射剂及制备方法，通过优化提取过程中的工艺条件，获得的BMP纯度高、活性高、利用率高，并优化注射剂载体组分及比例，制得的骨修复注射剂具有需用量少、效果显著、使用方便等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 bmp 蛋白 及其 作为 修复 注射 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种BMP‑3的提取方法，包括下述步骤：1)粗提：将粉碎后的小牛腿皮质骨依次经1：1氯仿/甲醇处理10‑15h，3‑10％的H2O2处理10‑15h，于室温下用0.6mol/L的HCl处理3‑6min，将离心得到的分离液于37℃下调pH至7.2并加入其总重0.0006％的胶原酶浸提24h，减压浓缩后溶于终浓度为6mol/L脲/0.5mol/L CaCl2中提取24h，分离液经截留分子量为70KD的微孔滤膜过滤，经透析、离心后得粗制BMP，将其复溶于4mol/L盐酸胍/0.5mol/L CaCl2中，滤液再经透析，离心得BMP粗品；2)纯化：a)取160mg BMP粗品，溶于10ml的Buffer A中，20,000g下离心30min，取上清液对160mm×10mm的肝素亲和层析柱加样；所述Buffer A的组成为6mol/L脲/50mmol/L Tris·HCl/0.1mol/L NaCl，pH 7.0；b)层析柱以120cm/h的速度依次用以下三种缓冲液处理：Buffer A、含有0.15mol/L NaCl的Buffer A的Buffer B和含有0.5mol/L NaC1的Buffer A的Buffer C分别洗脱，收集Buffer C洗脱下来的蛋白质，获得所述BMP‑3。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于天津中津生物发展有限公司，未经天津中津生物发展有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610183898.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种低糊率的微波装置
- 下一篇：抗逆相关蛋白RtHKT1及其编码基因与应用
- 同类专利
- 重组多肽及其组合物及方法-201780080729.6
- 孙大伟;许佩雯;陈芊蓓 - 博晟生医股份有限公司;奥斯堤欧制药有限公司
- 2017-12-29 - 2019-10-25 - C07K14/51
- 本发明提供一种重组多肽、包含该重组多肽的同型二聚体和异型二聚体蛋白、编码该重组多肽的核酸分子，以及包含该核酸分子的载体及宿主细胞。本发明也提供包含该重组多肽的组合物，以及制备、使用该重组多肽的方法。
- 用于诱导组织形成的化合物及其用途-201680062636.6
- O·F·祖阿尼 - 伊斯迪德股份公司
- 2016-08-25 - 2019-05-03 - C07K14/51
- 本公开提供环状肽、其变体或类似物或者环状肽模拟物，其具有在15个和35个之间的氨基酸，具有生长因子受体结合能力并且包含具有四个氨基酸的肽PEP1和具有五个氨基酸的肽PEP2；其中PEP1选自SAIS、SSLS、NAIS、SATS、SPIS、EPIS、SPIN、KPLS、EPLP、EPLT、SNIT、RSVK和RPVQ；并且其中PEP2选自LKNYQ、LKVYP、LKKYR、LRKHR、LKYHY、KFKYE、YGKIP、YKQYE、DHHKD、EQLSN、IGEMS、LGEMS、KEVQV和KKATV。
- 诱导组织形成的化合物及其应用-201680062130.5
- O·F·祖阿尼 - 伊斯迪德股份公司
- 2016-08-25 - 2019-02-05 - C07K14/51
- 本公开内容提供了具有生长因子受体结合能力的包含8至30个氨基酸的肽、其变体或类似物，其中相对于PEPREF，所述肽、其变体或类似物的结构坐标的RMSD值是
(埃)或更少。
- 改善的TGF-β超家族蛋白的纯化-201680062013.9
- C·T·布朗;P·D·罗伯特森;E·金斯利;A·卡罗那 - 佰欧维恩图斯有限责任公司
- 2016-10-21 - 2019-01-04 - C07K14/51
- 本发明公开了纯化TGF‑β超家族蛋白，包括成骨蛋白，如骨形态发生蛋白(BMP)的方法。
- 一种经修饰的生长分化因子及其制备方法和应用-201710500854.X
- 崔文宏 - 江苏豪思生物科技有限公司
- 2017-06-27 - 2018-10-30 - C07K14/51
- 本发明公开了一种经修饰的生长分化因子，由修饰物与生长分化因子偶联形成，所述生长分化因子为：(a)来源于哺乳动物的天然生长分化因子11；(b)将所述天然生长分化因子11的氨基酸序列经过1个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有促进神经元再生能力的由天然生长分化因子11衍生的蛋白质或多肽；或(c)与(a)或(b)所示的氨基酸序列具有至少50％同源性且具有促进神经元再生能力的由(a)或(b)所示的氨基酸序列衍生的蛋白质或多肽。本发明的经修饰的生长分化因子可以更好地用于预防、改善和治疗老年痴呆症，还可以起到增强记忆力的作用。另外，生长分化因子所调控的代谢产物具有诊断和筛查老年痴呆症的用途。
- 一种重组人骨形态发生蛋白-2的循环层析复性方法-201510296401.0
- 彭继学;张东刚;屈长宏;刘启省;杨建军 - 烟台正海生物科技股份有限公司
- 2015-06-02 - 2018-07-20 - C07K14/51
- 本发明公开了一种重组人骨形态发生蛋白‑2的循环层析复性方法。本发明提供了一种重组人骨形态发生蛋白‑2的复性方法，包括如下步骤：1)变性重组人骨形态发生蛋白‑2包涵体，得到变性后蛋白；2)将所述变性后蛋白进行亲和层析复性，收集洗脱液，得到复性后重组人骨形态发生蛋白‑2二聚体；所述重组人骨形态发生蛋白‑2氨基酸序列为序列表中序列2。本发明的实验证明，本发明的方法复性rhBMP‑2蛋白，蛋白浓度高，试剂消耗少，复性率达70％以上，本发明方法适于工业规模化生产；同时也为同类重组蛋白药物的研发生产提供参考。
- 一种用于修复软骨和/或治疗骨关节炎的肽-201611243856.7
- 宋燕;许元生;卢肖宇 - 广州领晟医疗科技有限公司
- 2016-12-29 - 2018-06-22 - C07K14/51
- 本发明公开了一种包含23个氨基酸的肽(称为BM23肽)，该肽来源于BMP‑2的氨基酸序列，经突变和修饰而成。该肽相对于BMP‑2具有显著改善的稳定性和体内功效持续时间，具有促进骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞和促进软骨细胞增殖的活性，可以用于软骨修复和/或治疗骨关节炎。
- 用于诱导软骨形成的GDF‑5突变体-201280058254.8
- F·普罗吉尔;F·沃纳 - 生物制药协会祖尔生物科技医学发展有限公司
- 2012-12-05 - 2018-01-09 - C07K14/51
- 本发明涉及GDF‑5相关蛋白，其具有改善的诱导软骨形成的能力和降低的诱导骨形成的能力。该新型蛋白在治疗软骨缺损中是特别有用的，其中骨组织的形成是不希望的。
- BMP‑ALK3拮抗剂和促进骨生长的用途-201080024908.6
- J·西拉 - 阿塞勒隆制药公司
- 2010-03-30 - 2017-11-07 - C07K14/51
- 在某些方面，本发明提供用于促进骨生长和增加骨密度和强度的组合物和方法。在某些实施方案中，本发明提供包括ALK3‑Fc融合蛋白在内的ALK3多肽。
- 一种重组人骨形态发生蛋白‑2的纯化生产方法-201310432794.4
- 张东刚;李东升 - 烟台正海生物科技股份有限公司
- 2013-09-22 - 2017-09-15 - C07K14/51
- 本发明公开了一种重组人骨形态发生蛋白‑2的纯化生产方法。该方法包括如下步骤1）裂解含有rhBMP‑2蛋白的包涵体，得到包涵体裂解液；2）对所述包涵体裂解液依次进行亲和层析和阳离子交换层析，分离纯化得到变性重组人骨形态发生蛋白‑2溶液；3）对所述变性rhBMP‑2蛋白进行复性，得到复性rhBMP‑2蛋白粗品；4）对所述复性rhBMP‑2蛋白粗品依次进行亲和层析和凝胶过滤层析分离纯化，得到复性rhBMP‑2蛋白纯品。利用本发明所提供的方法纯化rhBMP‑2蛋白，制备的产品纯度达95%以上，蛋白收率为9.4%，内毒素和DNA残留均符合生物药物质量要求，本发明方法适于工业规模化生产；同时也为同类重组蛋白药物的研发生产提供参考。
- 重组人骨形态发生蛋白-2的制备方法-201410405887.2
- 刘爽;邓小霞;庞玉;王子华;孙晓悦 - 吉林金梓源生物科技股份有限公司
- 2014-08-15 - 2016-11-30 - C07K14/51
- 本发明提供了一种在大肠杆菌以包涵体形式表达重组人骨形态发生蛋白‑2(recombinant human bone morphogenetic protein‑2,rhBMP‑2)的制备方法，其包括如下主要步骤：高压匀浆破碎菌体细胞、漂洗包涵体和调节不同pH值、尿素变性溶解所述包涵体蛋白、所述包涵体蛋白质的控速复性、离心、超滤膜浓缩、过滤除菌、冷冻干燥制成成品等步骤。本发明的制备方法利用在漂洗过程中通过数次调节不同pH值和控制尿素浓度改变速度进行复性、并且通过超滤膜技术即可制备纯度高、活性高的rhBMP‑2。同时可以省略层析步骤，通过现代超滤膜技术即可满足产品质量要求，大大缩短了工时、降低了生产成本。本发明可高效、简便、低成本地获得rhBMP‑2纯品。
- 一种BMP-3蛋白及其作为骨修复注射剂的制备方法及应用-201610183898.X
- 宋富智;梁世昌;宋德顺 - 天津中津生物发展有限公司
- 2016-03-28 - 2016-08-10 - C07K14/51
- 本发明提供了一种BMP‑3的提取及含BMP‑3的注射剂的制备方法。通过提取部分纯化的BMP‑3与胶原蛋白及PEG 2000，泊洛沙姆和PVP制得注射剂。本发明提供了一种以天然提取、部分纯化的BMP为基础并具有缓释作用的最佳载体的注射剂及制备方法，通过优化提取过程中的工艺条件，获得的BMP纯度高、活性高、利用率高，并优化注射剂载体组分及比例，制得的骨修复注射剂具有需用量少、效果显著、使用方便等优点。
- 温敏性骨生长组合物-201480026818.9
- K·T·桑佩斯;M·菲尔布鲁克;A·希德林;J·M·麦克弗森 - 建新公司
- 2014-03-13 - 2015-12-30 - C07K14/51
- 一种非侵入式可注射组合物，其含有水介质中的I型胶原、成骨生长因子(OSF)如骨形态发生蛋白以及可逆性温敏性的生物可降解聚合物(如泊洛沙姆407)。所述制剂可以非侵入式地施用，例如通过注射施用，从而避免了目前市售的许多骨诱生产品的局限性。可注射的成骨制剂在所需的部位有效诱导骨形成。可注射的悬液可以伴随生物可吸收的骨矿质复合物(例如羟基磷灰石、磷酸三钙)和/或糖胺聚糖(例如透明质酸、硫酸肝素)一起使用，以成型为油灰(putty)和/成板为骨移植替代植入物，从而在骨折愈合和脊柱融合术过程中诱导新骨形成。
- 优化的重组人骨形态发生蛋白质-2的DNA序列及其编码蛋白质-201410310953.8
- 曹建新 - 杭州瑞固生物技术有限公司
- 2014-07-01 - 2014-11-26 - C07K14/51
- 本发明公开了一种优化的重组人骨形态发生蛋白质-2的DNA序列及其编码蛋白质，其重组蛋白质rhBMP-2SEDIDNO．1为人的BMP-2成熟肽的C端110个氨基酸加上MGAKQ五肽，其中BMP-2成熟肽的第五个氨基酸H突变为Q；构建的重组rhBMP-2蛋白序列，通过对密码子的优化，得到优化的DNA序列SEDIDNO．2和SEDIDNO．3。BMP-2成熟肽在加五肽或二肽的重组后，蛋白的表达量可提高至30%以上，而且后续纯化和复性过程中更容易，能够得到更高的复性效率，因而其产量会明显增高，有更高的生物活性，更加适合工业化生产。
- 一种诱导成骨短肽及其制备方法和用途-201310581492.3
- 甘少磊;任卫卫;王超 - 北京博恩康生物科技有限公司
- 2013-11-20 - 2014-03-26 - C07K14/51
- 本发明涉及一种诱导成骨短肽，其结构式为GGCCSKIPKASSVPTELSAISTLYLDY。该诱导成骨短肽具有强的骨诱导活性、能够大规模合成和价格较低的优点。其克服了现有BMP-2生产设备、制备工艺非常复杂，生产周期长，产率低，难以大规模生产，价格过于昂贵等不足，市场前景广阔。
- 诱导成骨多肽、其制备方法和用途-201310681283.6
- 甘少磊;王超 - 北京博恩康生物科技有限公司
- 2013-12-16 - 2014-03-26 - C07K14/51
- 本发明涉及一种诱导成骨多肽，其结构式为KIPKASSVPTELSAISTLYLCC。该诱导成骨多肽具有较强的骨诱导活性、能够大规模合成和价格较低的优点。其克服了现有基因重组BMP-2生产设备、制备工艺非常复杂，生产周期长，产率低，难以大规模生产，价格过于昂贵等不足，市场前景广阔。
- 具有降低的免疫原性的BMP-7变体-201080064396.6
- M·E·帕特森;M·H·阿拉维-伊斯玛仪 - 史赛克公司
- 2010-12-21 - 2012-12-12 - C07K14/51
- 本发明涉及具有降低的免疫原性的骨形态发生蛋白。具体地，本发明涉及通过改变野生型BMP-7的氨基酸序列已被修饰以降低免疫原性的人BMP-7。
- 改善成骨细胞分化的寡肽-201080064676.7
- 姜银桢;严泰官;崔圭钰 - 奥齿泰种植体股份有限公司
- 2010-02-26 - 2012-11-07 - C07K14/51
- 本发明涉及适用于植体的寡肽，其选自由PEP7(SEQ ID No.1)、PEP71(SEQ ID No.2)、EPP72(SEQ ID No.3)、PEP73(SEQ ID No.4)、PEP74(SEQ ID No.5)、PEP75(SEQ ID No.6)和PEP76(SEQ ID No.7)组成的群组。本发明开发对于BMP特异性受体具有极高反应特异性的寡肽，由此增加成骨细胞分化和钙化程度，以便能显示出改善的骨整合和骨生成。
- 具有降低的BMP拮抗剂敏感性的骨形成蛋白2(BMP2)变体-201080011605.0
- 彼得拉·泽曼;斯特凡·蒙德洛斯;卡斯滕·赖斯纳;格奥尔格·杜达;尤利娅·齐默尔 - 生物技术拉比特有限公司
- 2010-03-11 - 2012-03-07 - C07K14/51
- 本发明涉及包含具有与具有SEQ??ID??No.1的成熟人BMP2相比至少90％氨基酸同一性的氨基酸序列或由具有与具有SEQ??ID??No.1的成熟人BMP2相比至少90％氨基酸同一性的氨基酸序列组成的分离的肽以及其应用，其特征在于，所述的氨基酸序列包含至少两个氨基酸取代，其中第一氨基酸取代发生在相应于SEQ??ID??No.1的N59、S88、E94、V99、K101和/或N102的位置。
- 专利分类
