[发明专利]表达重组蛋白G的细菌磁颗粒及其应用

摘要

本发明提供一种表达重组蛋白G的细菌磁颗粒，该表达重组蛋白G的细菌磁颗粒是对趋磁细菌MSR‑1重组株进行扩大培养、分离纯化得到的，并且还提供了表达重组蛋白G的细菌磁颗粒在用于血型不规则抗体IgG的检测中的应用；本发明提供的表达重组蛋白G的细菌磁颗粒利用细菌磁颗粒的磁特性，在外加磁场的作用下可以帮助致敏红细胞凝集，一方面最大限度减少细菌磁颗粒的使用量，另一方面最大限度提高低效价IgG抗体的检测敏感性。

主权项

一种表达重组蛋白G的细菌磁颗粒的制备方法，所述重组蛋白G的序列是：5‑ACTT ACAAACTTGT CATTAATGGT AAAACATTGA AAGGCGAAAC AACTACTAAA GCAGTCGACG CAGAAACTGC AGAAAAAGCC TTCAAACAAT ACGCTAACGA CAACGGTGTC GATGGTGTGT GGACTTATGA TGATGCGACT AAGACCTTTA CGGTCACTGA A GGTTCA GGCGGAAGC GGCGGCGGAAGC GGAGGCTCA GGTAGCGGC ACTT ACAAACTTGT CATTAATGGT AAAACATTGA AAGGCGAAAC AACTACTAAA GCAGTCGACG CAGAAACTGC AGAAAAAGCC TTCAAACAAT ACGCTAACGA CAACGGTGTC GATGGTGTGT GGACTTATGA TGATGCGACT AAGACCTTTA CGGTCACTGA A‑3，其特征在于，所述方法包括如下步骤：a.构建细菌磁颗粒膜蛋白mamC/mamF基因缺失的趋磁细菌MSR‑1突变株；b.构建功能化细菌磁颗粒膜蛋白融合表达质粒；c.将功能化细菌磁颗粒融合表达质粒通过接合转入到步骤a制得的趋磁细菌MSR‑1突变株，构建趋磁细菌MSR‑1重组株；d.对趋磁细菌MSR‑1重组株进行培养；具体包括如下步骤：d‑a.向培养罐中加入第一培养基，加热灭菌15‑20min，加热温度为110‑120℃，将趋磁细菌MSR‑1重组株接种到培养罐中，无氧状态进行第一次培养，获得第一培养液；第一次培养的条件为：起始pH值为 5.3‑5.5，培养温度为28‑30℃，培养时间为1‑2天，摇床转速为250‑280转/分钟；d‑b.将第一培养液加入含有第二培养基的培养罐中，进行第二次培养；第二次培养的条件为：起始pH值为6.2‑6.3，培养温度为20‑22℃，培养时间为5‑8天，摇床转速为150‑180转/分钟，培养过程中通入氧气，通入氧气的方式为：间隔5min，通入20min氧气，间隔5min，通入10min空气，循环5次；所述第一培养基由重量份数为0.2‑0.3份甘油酸三乙酯、1.5‑3份多聚谷氨酸、0.2‑0.3份磷酸吡哆醛、0.5‑1份硝酸铵、0.02‑0.05份维生素C、10‑12份葡萄糖酸钙、0.2‑0.3份十二烷基硫酸钠、0.5‑1份月桂酰肌氨酸、0.5‑1份成纤维细胞生长因子和1‑2份琼脂组成；所述第二培养基由重量份数为1‑1.5份硬脂酰肌氨酸、0.2‑0.5份磷酸二氢钾、10‑12份果聚糖、0.5‑1份蛋白胨、0.1‑0.3份碳酸钙、0.5‑1份海藻酸钠、0.5‑0.7份硫酸亚铁、1‑2份脯氨酸和0.2‑0.5份硫酸镁组成；e.分离纯化，制得功能化细菌磁颗粒。