[发明专利]一种重组载体及其在制备或筛选抗流感药物中的应用有效
| 申请号： | 201610139667.9 | 申请日： | 2012-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN105602989B | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 马志永;魏建超;史子学;邵东华;李蓓蓓;晏文君;朱紫祥 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/70;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 朱水平;沈利 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种重组载体及其在制备或筛选抗流感药物中的应用。该重组载体含有对氧磷酸酶3基因的开放阅读框，将PCR扩增后得到的对氧磷酸酶3基因的开放阅读框片段经酶切后连接进入载体制得该重组载体。本发明优点在于，所提供的重组载体可用于基因治疗流感或针对流感病毒进行核酸免疫；本发明提供的细胞模型，可用于病毒研究，特别是猪流感病毒致病机理研究，也可用于建立筛选抗病毒药物模型，特别是抗流感药物细胞模型。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 载体 及其 制备 筛选 流感 药物 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一种含有对氧磷酸酶3的基因放阅读框的重组载体在制备或筛选抗猪流感H3N2亚型的药物中的用途，其特征在于，所述重组载体由包括以下步骤的方法制备，（1）从Genbank登录号为NM_001044604.1的对氧磷酸酶3基因序列中，选取从序列中从起始密码子“ATG”到终止密码子“TGA”、“TAG”或“TAA”之间最长的序列1065bp碱基；（2）分别在5'和3'端设计扩增全长PCR引物，上游引物5'端添加HindⅢ酶切位点，CGG作为保护性碱基，下游引物5'端添加EcoRⅠ酶切位点；（3）上游引物5'‑CGGAAGCTTATGGGGAAGCTGGTGGCTCTGA‑3'；（4）下游引物5'‑CGGGAATTCCTAGAGCACACAGTACAGAGCT‑3'；（5）以猪肺泡巨噬细胞提取的总RNA的反转录产物为模板，用设计的上下游引物PCR扩增得到对氧磷酸酶3序列，然后经过酶切后连接到真核表达载体相应酶切位点。
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