[发明专利]一种猪圆环病毒灭活疫苗效力检验方法

摘要

本发明公开了一种猪圆环病毒灭活疫苗效力检验方法，首先用猪圆环病毒灭活疫苗对实验用动物进行1--2次免疫，而后无菌采集动物血清，经灭活后，用维持液对无菌采集的免疫动物血清做倍比稀释，并用含200TCID₅₀/0.1mL的猪圆环病毒抗原于37℃环境下中和30-60min，将中和液接种于生长PK-15细胞的96孔细胞板中，置37℃的CO₂培养箱中培养后采用间接免疫荧光法进行染色观察，计算血清抗体的中和效价，判定猪圆环病毒灭活疫苗效价。本发明不但能定量检验出猪圆环灭活疫苗经过动物免疫接种后对动物体产生的血清中和抗体效价，而且抗原批间差异小，检验结果准确。

主权项

一种猪圆环病毒灭活疫苗效力检验方法，其特征在于：其包括以下步骤：1) 筛选猪圆环抗原抗体阴性动物作为实验动物，用猪圆环病毒灭活疫苗对实验动物进行1‑2次免疫，每次1‑2头份；2) 最后一次免疫后14‑21天，无菌采集实验动物血清，将收集到的血清在56℃下灭活30min，然后用维持液对血清做倍比稀释，得到不同稀释度的血清，每个稀释度的血清分别与猪圆环病毒抗原于37℃环境下中和30‑60min，得到中和液；3) 用细胞板培养PK‑15细胞，当生长密度达到50‑80%时，弃去培养液，取0.1‑0.2mL上述中和液接种于细胞板上，每个稀释度的血清中和液分别接种6孔细胞，并在37℃下吸附40‑60min，同时设不中和的病毒阳性对照细胞6孔和接种维持液的阴性对照细胞6孔；4) 在细胞板中加入维持液并置于37℃的CO₂培养箱中培养24h，然后弃去细胞板中的维持液，换用新鲜的维持液，继续置于37℃的CO₂培养箱中培养24h‑48h；5）弃去细胞板中的维持液，细胞采用间接免疫荧光法进行丙酮固定、然后荧光染色、按Reed‑Muench法计算血清的中和抗体效价，并以此判定猪圆环病毒灭活疫苗的效价。