[发明专利]基于FISH的厌氧消化发酵液中产甲烷菌群的检测方法

摘要

本发明公开一种基于FISH的厌氧消化发酵液中产甲烷菌群的检测方法：在分离去除发酵液中发酵残余物后再对分离产物进行荧光原位杂交。本发明利用分层离心方法使菌体、发酵残余物按照自身不同密度分散在碘海醇溶液的不同位置，效果明显，从而解决发酵残余物对杂交效果的影响；本发明还系统优化针对厌氧消化液中产甲烷菌的荧光原位杂交技术各项条件，使杂交的准确性和灵敏性大大提高，对今后FISH技术在厌氧发酵过程中产甲烷菌的检测具有重要意义。通过上述改进，本发明最终解决了FISH技术检测菌体时常常出现的杂质过多，镜检背景昏暗，计数不准确以及试验条件不明引起的杂交效果不理想等问题。

主权项

1.一种基于FISH的厌氧消化发酵液中产甲烷菌群的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体为：在分离去除发酵液中发酵残余物获得分离产物后再对分离产物进行荧光原位杂交；所述分离具体采用离心的方式，所述离心是在向所述发酵液中加入碘海醇溶液后进行的；所述离心的条件为13000rpm、30min，所述碘海醇溶液的浓度为0.6g/1mL；所述分离后需对分离产物进行清洗，所述清洗后还需对分离产物进行固定获得固定试样；其中，所述固定具体指，向所述清洗后的分离产物中加入多聚甲醛溶液、固定，获得的固定试样还需用Na5P3O10溶液稀释、超声分散，加入Na5P3O10溶液后分离产物中的Na5P3O10的最终浓度为400mg/L；所述超声分散的时间为3min；所述荧光原位杂交前需将分离产物脱水固定；所述脱水固定的具体操作为：将所述分离产物滴至载玻片孔、干燥；然后再向载玻片孔中加入琼脂糖溶液、再干燥；最后将载玻片浸入乙醇中脱水、干燥；其中：每个载玻片孔中滴加分离产物的量为5‑10μL，所述干燥的条件为46℃、15min；每个载玻片孔中加入琼脂糖溶液的量为8μL；所述再干燥的条件为46℃、30min；所述脱水具体为将载玻片分别浸入60％、80％、100％乙醇中3min；所述将载玻片浸入乙醇中脱水、干燥，其中干燥的条件为46℃。