[发明专利]利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法

摘要

本发明提供一种利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，包括：在牛乳加入水和胰蛋白酶和胃蛋白酶进行酶解，灭酶后经喷雾干燥得粉状酪蛋白水解物；酪蛋白水解物通过等电点沉淀分离；采用反相钢柱，将电点沉淀所得纯化物通过制备液相，再次对样品进行分离纯化，根据样品极性的不同，将样品分为若干段，通过建模，对该促睡眠粗体物进行活性评价；采用全细胞膜片钳技术，给予30-60PA,3000-4000ms诱发动作电位，给药100-150μmol/L,记录电生理图谱，通过放电数目和频率，筛选出具有较好促睡眠的活性片段。本发明操作简单，分离效果好，所得粗提取不仅可以缩短入睡的时间，还可以调节睡眠节律，为失眠症患者的健康提供更好的保障。

主权项

一种利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在容器中加入水，升温至40℃‑60℃，加入牛乳和蛋白酶进行酶解，酶解条件为：水和牛乳体积比为100：10‑15、pH值7.5‑8.5、时间2‑4h，所述蛋白酶为胰蛋白酶和胃蛋白酶，胰蛋白酶的加入量为牛乳质量的0.2%‑0.6%，胃蛋白酶的加入量为牛乳质量的0.06%‑0.12%，酶解完成后，灭酶，喷雾干燥，得粉状酪蛋白水解物；（2）酪蛋白水解物通过等电点沉淀分离，条件为pH4.5‑6、乙醇浓度60%‑90%、沉淀时间为1‑3h；（3）采用反相钢柱，将步骤（2）所得沉淀物通过制备液相，再次对样品进行分离纯化，根据样品极性的不同，将样品分为若干段，通过建模，对该促睡眠粗体物进行活性评价；（4）急性分离大鼠的下丘脑腹外侧视前区脑片，厚度约300‑500um，然后采用全细胞膜片钳技术，借助去极化方波，给予30‑60PA,3000‑4000ms诱发动作电位，给药100‑150 μmol /L,记录电生理图谱，通过放电数目和频率，筛选出具有较好促睡眠的活性片段。